[發明專利]一種人胚胎干細胞的培養方法

無效

• 申請號: 200710123000.0
• 申請日: 2007-07-06
• 公開（公告）號: CN101338301A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發明（設計）人: 李凌松
• 申請（專利權）人: 李凌松
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08
• 代理公司: 北京元中知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 王明霞

1、一種人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，包括以下步驟：

a)人胚胎干細胞的消化；

b)將消化后的人胚胎干細胞接種于培養基包被的培養皿上，所述培養基包被的培養皿為：將Gelatin水溶液均勻鋪滿培養皿，室溫靜置后，吸出Gelatin水溶液；

c)將接種后的人胚胎干細胞培養傳代。

2、根據權利要求1所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述人胚胎干細胞的消化為：用胰酶水溶液消化人胚胎干細胞3min，吸出胰酶水溶液，加入培養液吹打，得到大小較為均一的人胚胎干細胞克隆。

3、根據權利要求2所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述培養液包括：Knockout?DMEM?80ml，血清替代物20ml，堿性成纖維細胞生長因子400ng，L-谷胺酰胺2mM，非必需氨基酸0.1mM，β-巰基乙醇0.1mM，所述人胚胎干細胞克隆由50-100個細胞構成。

4、根據權利要求1所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述Gelatin水溶液濃度為0.1％～0.2％，所述室溫靜置時間為30分鐘。

5、根據權利要求4所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述Gelatin水溶液濃度為0.1％。

6、根據權利要求1或4或5任何一項所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述Gelatin為豬皮來源的。

7、根據權利要求2所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述胰酶濃度為0.05％～0.25％。

8、根據權利要求7所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于，所述胰酶濃度為0.25％。

9、根據權利要求1所述的人胚胎干細胞的培養方法，其特征在于所述將接種后的人胚胎干細胞培養傳代的方法為，將接種后的人胚胎干細胞在36-37.5℃下培養，每天更換一次培養液，5-7天傳代一次。

10、權利要求1-8任何一項所述的人胚胎干細胞的培養方法制備的人胚胎干細胞系。