[發明專利]一種乳粉中乳糖含量測定方法

無效

• 申請號: 200710121930.2
• 申請日: 2007-09-18
• 公開（公告）號: CN101178365A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發明（設計）人: 侯彩云;孫式興;牛巍;祝曉芳;孫建平;王啟輝;石文貞;傅澤田;張健
• 申請（專利權）人: 中國農業大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78;G01N21/25
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司
• 代理人: 朱印康

技術領域

本發明屬于乳糖檢測技術，是基于乳糖在苯酚、氫氧化鈉、苦味酸和亞硫酸氫鈉作用下生成桔紅色的絡合物，結合自行開發的RQS1.0圖像分析軟件提取色度信息，完成的一種乳粉中乳糖含量測定方法。

背景技術

乳糖是乳粉中主要的碳水化合物，是乳粉的特征指標之一。目前可行的乳糖測定方法有多種。其中，國家規定的標準方法有：GB/T?5009.7-2003《食品中還原糖的測定》，GB/T?5413-1997《嬰幼兒配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和總糖的測定》，以及SN/T?0871-2000《進出口乳及乳制品中乳糖的測定方法》。

GB/T?5009.7-2003《食品中還原糖的測定》規定了直接滴定法和高錳酸鉀滴定法兩種方法。直接滴定法的原理是：試樣經除去蛋白質后，在加熱條件下，以次甲基藍作指示劑，滴定標定過的堿性酒石酸銅溶液(用還原糖標準溶液標定堿性酒石酸銅溶液)，根據樣品液消耗體積計算還原糖的含量。高錳酸鉀滴定法的原理是：試樣經除去蛋白質后，其中還原糖將銅鹽還原為氧化亞銅，加入硫酸鐵后，氧化亞銅被氧化為銅鹽，以高錳酸鉀溶液滴定氧化作用后生成的亞鐵鹽，根據高錳酸鉀消耗量，計算氧化亞銅含量，再查《相當于氧化亞銅質量的葡萄糖、果糖、乳糖、轉化糖質量表》得還原糖量。

GB/T?5413-1997《嬰幼兒配方食品和乳粉乳糖、蔗糖和總糖的測定》規定了高效液相色譜法、萊因-埃農氏法和酶-比色法測定乳糖含量的方法。其中萊因-埃農氏法的原理是：樣品經除去蛋白質后，在加熱條件下，直接滴定已標定過的費林氏液，樣液中的乳糖將費林氏液中的二價銅還原為氧化亞銅。以次甲基藍為指示劑，在終點稍過量時，乳糖將藍色的氧化型次甲基藍還原為無色的還原型次甲基藍。根據樣液消耗的體積，計算乳糖含量。

以上這幾種方法其原理是相似的，都是利用乳糖的還原性與不同的試劑發生氧化還原反應，選擇合適的指示劑，采用滴定的方法測得乳糖含量。但是，滴定方法有其自身的缺點：試劑配制繁瑣、費時，滴定終點判斷不明顯，滴定條件較為苛刻。

SN/T?0871-2000《進出口乳及乳制品中乳糖的測定方法》原理是：試樣中加入硫酸鋅溶液和氫氧化鋇溶液以沉淀蛋白質等雜質，經離心后，上層樣液中的乳糖在苯酚、氫氧化鈉、苦味酸和亞硫酸氫鈉作用下生成桔紅色的絡合物，用分光光度法測定，用標準曲線法定量。該方法采用分光光度法直接測定乳粉中乳糖的含量，相對簡單、快速。但是其受到分光光度計測定樣品量的限制，一次測定樣品量較少，而且還需要進行空白試驗。

此外，高效液相色譜法雖然準確、靈敏，但費用大、難以普及。

本申請的乳粉中乳糖含量測定方法結合SN/T?0871-2000《進出口乳及乳制品中乳糖的測定方法》和自行開發的RQS1.0圖像分析軟件，采用SN/T?0871-2000方法的前處理，利用RQS1.0圖像分析軟件提取色度信息，測定乳糖含量，此方法可以一次測定多個乳粉樣品，具有高度的自動化程度，簡單、快速。本申請內容未見他人文章發表。

發明內容

本發明的目的是提供一種乳粉中乳糖含量測定方法，該方法是根據色度學原理結合乳糖和發色劑作用生成桔紅色的絡合物，即不同乳糖含量的樣品經沉淀蛋白質后，在苯酚、氫氧化鈉、苦味酸和亞硫酸氫鈉作用下生成深淺不同的桔紅色絡合物，其色度值與乳糖含量高低呈線性相關，用計算機軟件自動分析獲得樣品色度值，然后計算乳糖含量。

具體步驟如下：

步驟1：配制溶液

配制乳糖標準工作液：準確稱取于70℃真空烘箱中烘至恒重的適量的乳糖標準品(純度≥99％)，加水溶解，移入容量瓶中，稀釋至刻度，配成濃度為1mg/mL的標準工作液。

配制發色劑：1％～5％(v/v)苯酚溶液，3％～10％(v/v)氫氧化鈉溶液，1％～5％(v/v)苦味酸溶液，1％～5％(v/v)硫酸氫鈉溶液，使用時，按順序以體積比1∶2∶2∶1配制，此發色劑置于冰箱中可使用一周。

配制沉淀劑：3％～10％(v/v)氫氧化鋇溶液，3％～10％(v/v)硫酸鋅溶液；

步驟2：試樣處理

稱取適量試樣，用水溶解移入容量瓶中，稀釋至刻度，配成濃度為8～12mg/mL。并準確移取定量于離心管中，加入定量試樣水溶液0.8～1倍的硫酸鋅溶液，0.01～0.05倍的氫氧化鋇溶液，用小玻璃棒輕輕攪勻后，以約6000r/min的轉速離心10min，取上層澄清液作為樣液，供測定用。