[發(fā)明專利]細(xì)胞角蛋白19片段化學(xué)發(fā)光免疫分析測(cè)定試劑盒及其制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710121167.3
• 申請(qǐng)日: 2007-08-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101377501A
• 公開(kāi)（公告）日: 2009-03-04
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 石根;林金明;王栩;應(yīng)希堂;胡國(guó)茂
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 北京科美東雅生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/543;G01N21/76;G01N33/574
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及免疫分析醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體地，本發(fā)明提供了一種細(xì)胞角蛋白19片段化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒及其制備方法。

背景技術(shù)

肺癌具有惡性程度高、病程發(fā)展快的特點(diǎn)。近年來(lái)其發(fā)病率呈上升趨勢(shì)，是危害人類健康和導(dǎo)致人類死亡的常見(jiàn)腫瘤之一。肺癌可分為非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)和小細(xì)胞肺癌(SCLC)。NSCLC是肺癌中最常見(jiàn)的一種，約占肺癌病例的70％～80％，各期肺癌的五年存活率只有13％。因此提高肺癌的診斷水平，對(duì)患者的及時(shí)治療和預(yù)后監(jiān)測(cè)具有重要意義。

可溶性細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin?19?fragment，CYFRA21-1)是一種新的腫瘤標(biāo)記物，尤其對(duì)非小細(xì)胞肺癌(nonsmall?cell?lung?cancer，NSCLC)的診斷有重要意義。

細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin?19?fragment)中的CYFRA21-1是一種分化特異的蛋白質(zhì)，是一種等電點(diǎn)為5.2，相對(duì)分子質(zhì)量為40,000的酸性胞漿蛋白，屬于細(xì)胞結(jié)構(gòu)蛋白范疇，廣泛存在于上皮細(xì)胞，是組成細(xì)胞骨架的蛋白質(zhì)之一。由它形成的細(xì)胞體中間絲的某些片段是可溶的，并且可以用兩種單克隆抗體(BM19.21和KS19.1)識(shí)別出細(xì)胞角蛋白19的21和1兩個(gè)表位(抗原決定簇)。該片段即取名為可溶性細(xì)胞角蛋白19片段(cytokeratin?19?fragment，CYFRA21-1)，它在正常人血清中含量較低，在上皮源性惡性腫瘤時(shí)常有過(guò)量表達(dá)，并且由于患惡性腫瘤時(shí)激活的蛋白酶加速細(xì)胞角蛋白19的降解，使得大量CYFRA21-1產(chǎn)生。在上皮細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化過(guò)程中，激活的蛋白酶加速角蛋白的降解，使得大量角蛋白片段釋放人血循環(huán)，尤其是CYFRA21-1在肺癌患者血循環(huán)中含量豐富，是近年來(lái)被推廣的一種新型肺癌標(biāo)志物。

CYFRA21-1是細(xì)胞角蛋白19的片段，由細(xì)胞結(jié)構(gòu)中主要成分細(xì)胞角蛋白19的兩個(gè)單克隆抗體(BM19.21和KS19.1)組成，它是一種可溶性酸性多肽。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者利用針對(duì)細(xì)胞角蛋白19片段的兩種特異性單克隆抗體(BM19.21和KS19.1)建立起了多種檢測(cè)各種體液或血液中細(xì)胞角蛋白19片段的特異性方法。同時(shí)測(cè)定神經(jīng)特異烯醇化酶(NSE)和癌胚抗原(CEA)含量，可以顯著提高肺癌診斷的特異性。

自從1959年，Yallow和Berson發(fā)明了免疫分析之后，免疫分析在臨床化學(xué)領(lǐng)域中日益成為主要的分析工具。免疫分析可以分為以放射免疫分析(RIA)為代表的第一代免疫分析技術(shù)，以酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)為代表的第二代免疫分析技術(shù)，以化學(xué)發(fā)光免疫分析(CLIA)為代表的第三代免疫分析技術(shù)，以及新興起的第四代微粒體發(fā)光免疫分析技術(shù)。

對(duì)CYFRA21-1的定量分析，目前常用的是放射免疫分析(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)，其中RIA必須用¹²⁵I等放射性元素標(biāo)記，檢測(cè)設(shè)備復(fù)雜，必須用專門(mén)的儀器測(cè)定，其放射性核素的半衰期短，不能長(zhǎng)期保存，同時(shí)也給實(shí)驗(yàn)操作人員帶來(lái)了放射性傷害。ELISA檢測(cè)靈敏度不夠高，檢測(cè)范圍窄，影響因素較多，易造成假陰性和假陽(yáng)性等缺點(diǎn)也不能滿足臨床的要求，因此，化學(xué)發(fā)光免疫分析方法(CLIA)應(yīng)運(yùn)而生。

20世紀(jì)70年代，Arakawe首次報(bào)道利用化學(xué)發(fā)光分析超微量物質(zhì)，尤其是臨床分析微量的活性物質(zhì)，隨后化學(xué)發(fā)光在臨床上的應(yīng)用進(jìn)入一個(gè)飛速發(fā)展的時(shí)期。化學(xué)發(fā)光免疫分析方法(CLIA)靈敏度高，可以達(dá)到10^-18mol/L；快速，發(fā)光信號(hào)在幾秒鐘內(nèi)產(chǎn)生；操作簡(jiǎn)便，測(cè)試過(guò)程中不使用有害試劑。化學(xué)發(fā)光免疫分析法因標(biāo)記方法的不同而分為直接標(biāo)記法和化學(xué)發(fā)光酶免疫分析方法。

現(xiàn)有技術(shù)中的化學(xué)發(fā)光免疫分析定量試劑盒為封閉式全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量系統(tǒng)，需要昂貴的全自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x，從而限制了推廣使用，無(wú)法廣泛地應(yīng)用于臨床診斷和科研工作。本發(fā)明是在酶聯(lián)免疫分析的基礎(chǔ)上應(yīng)用酶催化發(fā)光底物，通過(guò)檢測(cè)發(fā)光底物產(chǎn)生的光信號(hào)代替酶聯(lián)免疫分析中的顯色底物，因而其靈敏度大大提高，并且操作簡(jiǎn)便適用性廣，既可應(yīng)用于開(kāi)放式的半自動(dòng)化學(xué)發(fā)光測(cè)量?jī)x，也可用于全自動(dòng)的測(cè)量系統(tǒng)，可實(shí)現(xiàn)大批量快檢測(cè)，使用成本低，更易推廣應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的發(fā)明人為了解決上述問(wèn)題提出并完成了本發(fā)明。

本發(fā)明的目的是提供一種細(xì)胞角蛋白19片段化學(xué)發(fā)光免疫分析定量測(cè)定試劑盒。

本發(fā)明的再一目的是提供一種制備上述試劑盒的方法。