[發明專利]將多種細胞有序粘附至同一基底設定位置處的裝置及粘附方法

有效

• 申請號: 200710119997.2
• 申請日: 2007-08-06
• 公開（公告）號: CN101363019A
• 公開（公告）日: 2009-02-11
• 發明（設計）人: 李勇;陳振玲;蔣興宇
• 申請（專利權）人: 國家納米科學中心
• 主分類號: C12N11/00
• 分類號: C12N11/00;C12Q1/04
• 代理公司: 北京泛華偉業知識產權代理有限公司
• 代理人: 王鳳華

1.一種將多種細胞粘附至同一基底設定位置處的裝置，包括：

一基底；所述基底的上表面上蒸鍍有一鈦粘附層或鉻粘附層，該鈦粘附層或鉻粘附層上蒸鍍有一金層；所述鈦粘附層或鉻粘附層的厚度為2～10nm；所述金層厚度為20～50nm；

一下表面上具有至少一組微凹槽單元的經氧化處理后的具親水表面的聚二甲基硅氧烷印章；

所述微凹槽單元包括：

由左至右依次排列的間距為50～500μm的第一凹槽、第二凹槽、第三凹槽、第四凹槽、第五凹槽和第六凹槽；所述第一凹槽中間段、第二凹槽中間段和第三凹槽中間段相互平行；所述第四凹槽中間段靠近第三凹槽中間段的一側槽邊與所述第三凹槽中間段平行，并且第四凹槽中間段遠離第三凹槽中間段的一側槽邊自中間段端點開始，其長度每增加3～5mm，其槽寬向遠離第三凹槽中間段的方向增加50～300μm，呈一階梯狀槽寬的凹槽中間段，第四凹槽中間段中槽寬最窄的一段凹槽稱為第一段凹槽；所述第五凹槽中間段和第六凹槽中間段分別為與所述第四凹槽中間段的階梯狀邊形狀相同，槽寬相等的階梯狀凹槽中間段；所述第一凹槽中間段、第二凹槽中間段和第三凹槽中間段之外的兩端部段分別向左側方向傾斜；所述第四凹槽中間段、第五凹槽中間段和第六凹槽中間段之外的兩端部段分別向右側方向傾斜；

所述第一凹槽、第二凹槽、第三凹槽、第四凹槽、第五凹槽和第六凹槽的長度均在1.2～2.0cm范圍內；所述第四凹槽的自中間段端點開始的第一段凹槽寬度、第一凹槽寬度、第二凹槽寬度、第三凹槽寬度、第五凹槽寬度和第六凹槽寬度均在50～300μm范圍內；

所述第一凹槽、第二凹槽、第三凹槽、第四凹槽、第五凹槽和第六凹槽的槽端處分別設有與相應的凹槽相通的垂向通孔；

所述經氧化處理后的具親水表面的聚二甲基硅氧烷印章的下表面貼覆于所述基底的金層之上，所述的第一凹槽、第二凹槽、第三凹槽、第四凹槽、第五凹槽和第六凹槽與所述基底的金層可逆結合形成封閉的管道；

和

在封閉的管道形成10min內，通過向所述第二凹槽和第五凹槽的流通管腔中通入濃度為20～200μg/ml細胞外基質蛋白的PBS磷酸鹽緩沖液；隨后向第一凹槽和第三凹槽的流通管腔中通入濃度為100～1000μg/ml抗拒蛋白質吸附的聚(L-賴氨酸)-聚乙二醇-聚(L-賴氨酸)的嵌段共聚物(PLL-PEG-PLL)的乙醇水溶液，所述乙醇水溶液中乙醇與水的體積比為30％～80％；再往第四凹槽和第六凹槽的流通管腔中通入濃度為1～5mM硫醇的PBS磷酸鹽緩沖液；而于1～3h后，在所述第二凹槽和第五凹槽內的金層上形成的細胞外基質蛋白；在所述第一凹槽和第三凹槽的金層表面上及周圍形成抗拒蛋白質吸附的聚(L-賴氨酸)-聚乙二醇-聚(L-賴氨酸)的嵌段共聚物的吸附層；在所述第四凹槽和第六凹槽內的金層表面上及周圍形成由1～5mM硫醇的PBS磷酸鹽緩沖液中硫醇分子形成的惰性單分子膜層；所述的硫醇是六聚聚乙二醇鏈取代的硫醇化合物；

所述的六聚聚乙二醇鏈取代的硫醇化合物是HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₆OH、HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₅OH或HS(CH₂)₁₁(OCH₂OCH₂)₃OH。

2.按權利要求1所述的將多種細胞粘附至同一基底設定位置處的裝置，其特征在于，所述的細胞外基質蛋白為纖維結合蛋白、膠原蛋白或層粘連蛋白。

3.按權利要求1所述的將多種細胞粘附至同一基底設定位置處的裝置，其特征在于，所述的聚(L-賴氨酸)-聚乙二醇-聚(L-賴氨酸)的嵌段共聚物中的聚(L-賴氨酸)分子量范圍是3×10⁴～30×10⁴，聚乙二醇分子量范圍是200～1000。