[發明專利]一種微囊藻毒素單克隆抗體及其制備方法與應用

有效

• 申請號: 200710119212.1
• 申請日: 2007-07-18
• 公開（公告）號: CN101125889A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發明（設計）人: 何苗;盛建武;施漢昌
• 申請（專利權）人: 清華大學
• 主分類號: C07K16/18
• 分類號: C07K16/18;G01N33/577;C12N5/18
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢;任鳳華

1.一種制備微囊藻毒素-LR的單克隆抗體的方法，包括以下步驟：

1)在微囊藻毒素-LR的第七位氨基酸殘基N-甲基脫氫丙氨酸上引入一個氨基，得到經氨基修飾的微囊藻毒素-LR；再將該經氨基修飾的微囊藻毒素-LR與載體蛋白偶聯得到完全抗原A；

2)將步驟1)的完全抗原A免疫小鼠，取免疫小鼠的脾細胞，與小鼠骨髓瘤細胞融合，篩選出陽性雜交瘤細胞株；培養所述陽性雜交瘤細胞株或將所述陽性雜交瘤細胞株注入同系小鼠腹腔誘生腹水，得到微囊藻毒素-LR的單克隆抗體。

2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述步驟1)中，用2-巰基乙胺在微囊藻毒素-LR的第7位氨基酸殘基上引入一個氨基。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中的載體蛋白為牛血清白蛋白；所述偶聯方法為戊二醛法。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中用于免疫的小鼠為Balb/c小鼠；免疫方法為：每只小鼠每次免疫所用的所述完全抗原劑A量為15-40μg，兩次免疫的間隔時間為20-40天；免疫方式為皮下多點注射；

所述步驟2)中的小鼠骨髓瘤細胞為小鼠骨髓瘤細胞SP2/0。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述步驟2)中的篩選陽性雜交瘤細胞株的方法為：先用包被抗原篩選，再用微囊藻毒素-LR單體篩選至少1次；所述包被抗原為將所述步驟1)中的經氨基修飾的微囊藻毒素-LR多肽與載體蛋白偶聯得到的完全抗原B；所述完全抗原B與所述完全抗原A中的載體蛋白不相同。

6.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述陽性雜交瘤細胞株為能分泌抗Microcystin-LR單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株MC8C10，其保藏號為CGMCCNo.2101。

7.根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法中還包括純化所述單克隆抗體的步驟。

8.權利要求1至7中任一權利要求所述的方法制備的微囊藻毒素-LR的單克隆抗體。

9.微囊藻毒素-LR的單克隆抗體，由保藏號為CGMCC?No.2101的能分泌抗Microcystin-LR單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株MC8C10產生。

10.能分泌抗Microcystin-LR單克隆抗體的小鼠雜交瘤細胞株MC8C10，其保藏號為CGMCC?No.2101。

11.權利要求8或9所述的微囊藻毒素-LR的單克隆抗體在檢測微囊藻毒素-LR和/或純化微囊藻毒素-LR中的應用。