[發明專利]檢測鼻咽癌特征蛋白的優化質譜模型及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200710111286.0
• 申請日: 2007-06-21
• 公開（公告）號: CN101329350A
• 公開（公告）日: 2008-12-24
• 發明（設計）人: 曾益新;許洋
• 申請（專利權）人: 許洋
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574;G01N30/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測鼻咽癌血清特征蛋白的質譜模型，其特征在于：從血清中篩選出6個上 調蛋白和5個下調蛋白作為特征蛋白；選取上述11個特征蛋白中的任意兩個或兩個以上 的蛋白，根據各蛋白質峰的質荷比m/z值及以該蛋白的臨界峰值均值M，建立了鼻咽癌患 者與正常人、鼻咽良性疾病、鼻咽癌淋巴結轉移、鼻咽癌遠端轉移患者兩兩鑒別的血清特 征蛋白檢測質譜模型；其中鼻咽癌患者與正常人鑒別的質譜模型A由m/z＝8073，M≥4.21； m/z＝3935，M≤11.76繪制而成，鼻咽癌患者與鼻咽良性疾病鑒別的質譜模型B由 m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76繪制而成，鼻咽癌患者與鼻咽癌淋巴結轉移及 鼻咽癌遠端轉移鑒別的質譜模型C由m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56；m/z＝11470， M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70繪制而成。

2、一種檢測鼻咽癌血清蛋白質譜模型的制備方法，包括以下步驟：

1)4℃條件下2小時內收集經病理明確診斷的鼻咽癌患者血清及經體檢確定為正常的 健康者的血清作為兩組血清標本，進行-80℃低溫冷凍備用；

2)采用WCX或C8及C18疏水基質磁珠對所述鼻咽癌患者及正常人的兩組血清標本的 蛋白進行吸附；

3)用激光解吸/電離飛行時間質譜儀，用氮激光儀(337nm)和80cm或120cm飛 行管分析陣列，或用電噴霧電離已洗脫的血清蛋白后用液相色譜質譜聯用儀(LC-MS)對 結合在弱陰離子表面的WCX磁珠或C8及C18疏水基質磁珠上的兩組血清蛋白進行讀取， 由此獲得兩組蛋白質譜圖譜；

4)在每次實驗數據收集前，用標準蛋白及質譜的標準化質控O型血清校正儀器，使 蛋白質分子量誤差＜0.01％和臨界峰值均值M的CV＜5～10％，并精確地、定量地收集鼻 咽癌患者和正常人優化的血清質譜圖譜數據；

5)對所得數據進行統計學處理，根據鼻咽癌患者和正常人血清之間蛋白峰的差異， 檢測出2組血清蛋白質譜圖譜之間有11個穩定的差異蛋白及其臨界峰值，6個上調蛋白和 5個下調蛋白作為特征蛋白；將所述11個差異蛋白作為鼻咽癌蛋白質譜模型的特征蛋白；

6)選取所述11個特征蛋白中任意兩個或兩個以上的蛋白，以各蛋白質峰的質荷比m/z 值及以該蛋白的臨界峰值均值M構成用于檢測鼻咽癌血清特征蛋白質譜模型；所述的特異 蛋白質質荷比m/z和臨界峰值均值M分別為m/z＝8073，M≥4.21；m/z＝3935，M≤11.76； m/z＝15950，M≥12.86；m/z＝8604，M≤2.76；m/z＝25242，M≥0.33；m/z＝11686，M≤2.56： m/z＝11470，M≥1.71；m/z＝5065，M≤5.70。

3、選取如權利要求1所述的血清11個蛋白中任意兩個或兩個以上的特征蛋白，利用 該質譜模型，將受檢者血清中相應蛋白質的質荷比及該蛋白的臨界峰值均值M與本發明的 質譜模型逐一進行對比分析，就可應用于鼻咽癌的早期檢測、篩查和復發、轉移的評估。