[發(fā)明專利]牛分枝桿菌Mce4E蛋白、其制備方法及應(yīng)用

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710110627.2
• 申請日: 2007-06-07
• 公開（公告）號: CN101157722A
• 公開（公告）日: 2008-04-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙德明;徐廣賢;周向梅;楊建民;尹曉敏;馬李穎
• 申請（專利權(quán)）人: 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: C07K14/35
• 分類號: C07K14/35;C12N1/21;C12N15/31;G01N33/569
• 代理公司: 北京路浩知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 張慶敏

1.牛分枝桿菌Mce4E蛋白，其具有SEQ?ID?NO.1所示的氨基酸序列，或該序列經(jīng)替換、缺失或添加一個或幾個氨基酸形成的具有同等功能的氨基酸序列。

2.大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)PET30/Mce4E?CGMCCNo.1865。

3.牛分枝桿菌Mce4E的制備方法，包括如下步驟：

1)構(gòu)建含pET?30a/Mce4的基因工程菌；

2)經(jīng)擴(kuò)大培養(yǎng)后，用IPTG誘導(dǎo)表達(dá)；

3)裂解菌體，分離并溶解包涵體，純化Mce4E蛋白。

4.如權(quán)利要求3所述的方法，其中所述的基因工程菌為大腸埃希氏菌(Escherichia?coli)PET30/Mce4E?CGMCC?No.1865。

5.如權(quán)利要求3所述的方法，其還包括對純化后的蛋白進(jìn)行復(fù)性。

6.如權(quán)利要求5所述的方法，其中復(fù)性的方法是依次用含有0～8mol/L濃度梯度的尿素的基礎(chǔ)緩沖液，按濃度梯度由大到小，對純化后的Mce4E蛋白進(jìn)行透析復(fù)性，所述基礎(chǔ)緩沖液含50mmol/L?TrisHCl，1mmol/L?EDTA，1mmol/L?GSSG，5mmol/L?GSH，10％甘油，10mmol/L?PMSF。

7.如權(quán)利要求4～6所述的方法，其中誘導(dǎo)表達(dá)的條件是在26℃下用0.2mmol/L的IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)。

8.含有權(quán)利要求1所述蛋白的檢測試劑盒。

9.如權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒的包被抗原為Mce4E蛋白以及Rpfc蛋白和MPB83蛋白。

10.如權(quán)利要求8或9所述的試劑盒，其特征在于該試劑盒包括：包被抗原的酶標(biāo)板、酶標(biāo)抗體、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清及陰性血清、洗滌液、底物液、終止液。