[發明專利]修飾的核酸序列以及增加細胞系統中mRNA水平和蛋白質表達的方法

無效

• 申請號: 200710104933.5
• 申請日: 1998-10-20
• 公開（公告）號: CN101134966A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: L·H·陳;H·米德
• 申請（專利權）人: GTC生物治療學公司
• 主分類號: C12N15/30
• 分類號: C12N15/30;C12N15/67;C12N5/10;C12N1/21;C07K14/445;A61K48/00
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 胡國群

1.一種能在哺乳動物細胞中表達的寄生生物的修飾的已知核酸，其中的修飾包括通過用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選密碼子置換基因中的一個或多個含AT的密碼子來降低AT含量。

2.一種能在哺乳動物細胞中表達的寄生生物蛋白質的修飾的已知核酸，其中通過用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選密碼子置換mRNA不穩定基序來消除基因編碼序列中存在的至少一個mRNA不穩定基序。

3.權利要求1或2的修飾的核酸，其中由與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選的乳汁蛋白特異性密碼子置換已知基因的至少一個或多個密碼子。

4.一種能在哺乳動物細胞中表達的寄生生物的修飾的已知核酸，其中通過乳汁蛋白特異性密碼子的置換降低了已知編碼基因的總AT含量，并且其中用乳汁蛋白特異性密碼子置換消除了基因中存在的至少一個mRNA不穩定基序以及用優選的乳汁蛋白特異性密碼子置換了天然基因中的至少一個密碼子。

5.權利要求4的修飾的核酸，其中所述修飾的核酸在體外或體內哺乳動物細胞系統中能夠以天然基因表達水平的至少100％的水平表達所述蛋白質。

6.制備用于在哺乳動物細胞中表達的寄生生物的修飾的已知核酸的方法，包括用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選的乳房特異性密碼子置換天然基因中的一個或多個含AT的密碼子來降低天然基因的AT含量。

7.制備用于在哺乳動物細胞中表達的寄生生物蛋白質的修飾的已知核酸的方法，包括用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選的乳房特異性密碼子置換基因中的一個或多個mRNA不穩定基序來消除基因中至少一個mRNA不穩定基序。

8.權利要求5或6的方法，進一步包括用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選的乳房特異性密碼子置換編碼所述蛋白質的天然基因中的一個或多個密碼子。

9.用權利要求5或6的方法制備的修飾的核酸序列。

10.制備用于在哺乳動物細胞中表達的寄生生物的修飾的已知核酸的方法，包括下列步驟：

a)用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選乳汁蛋白質特異性密碼子置換基因中的一個或多個mRNA不穩定基序來消除編碼所述蛋白質的天然基因中至少一個mRNA不穩定基序。

b)用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的乳汁蛋白質特異性密碼子置換基因中的一個或多個含AT密碼子來降低編碼所述蛋白質的天然基因的AT豐富含量以及

c)用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的優選的乳房特異性密碼子置換編碼所述蛋白質的天然基因中的一個或多個密碼子。

11.使用權利要求10的方法制備的修飾的核酸。

12.權利要求1的修飾的核酸，其中所述寄生生物是瘧原蟲并且所述核酸是序列1或序列9的片段或與其特異性同源的序列。

13.權利要求1的修飾的核酸，其中所述寄生生物是瘧原蟲并且所述核酸是序列9或其片段或與其特異性同源的序列。

14.能夠在細胞系統中表達的修飾的核酸，其是序列1的片段或與其特異性同源的序列，其中使用與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的但可以有效降低天然基因總AT含量的所述細胞培養系統識別的密碼子置換一個或多個密碼子降低了該天然基因的AT含量。

15.能夠在細胞系統中表達的修飾的核酸，其是序列1的片段或與其特異性同源的序列，其中使用可以有效消除不穩定基序的且與所置換的密碼子編碼相同氨基酸的所述細胞系統識別的密碼子置換含有不穩定基序的一個或多個密碼子，消除了天然基因編碼序列中存在的至少一個mRNA不穩定基序。

16.權利要求14或15的修飾的核酸，其中用所述細胞系統的優選密碼子置換了天然基因中至少一個或所有的密碼子。

17.含有權利要求12的修飾的核酸的載體。

18.使用權利要求17的載體轉染或轉化的宿主細胞。

19.含有權利要求12的修飾的核酸的轉基因表達構建體。

20.非人轉基因動物，其種系含有權利要求12的修飾的核酸。