[發明專利]一種測定核糖核酸活性的方法

無效

• 申請號: 200710099980.5
• 申請日: 2007-06-01
• 公開（公告）號: CN101063175A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 孫德軍;霍英;李夏;李秉安;禹學軍
• 申請（專利權）人: 吉林敖東藥業集團延吉股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 關暢

1、一種測定核糖核酸活性的方法，是將核糖核酸用培養液制成每1ml中含核糖核酸0.01～50mg的溶液，作為供試品溶液，以培養液作為對照組溶液，測定供試品溶液和對照組溶液的粘附前細胞的吸收值和粘附后細胞的吸收值，然后，按照如下公式計算粘附率和粘附抑制率：

粘附率＝(粘附前細胞的吸收值-粘附后細胞的吸收值)/粘附前細胞吸收值×100％；

粘附抑制率＝(對照組粘附率-供試品粘附率)/對照組粘附率×100％；

其中，粘附前細胞的吸收值和粘附后細胞的吸收值的測定按如下過程進行：

1)測定粘附前細胞的吸收值

取測試溶液50μl，加小鼠脾細胞懸液50μl混勻，再加50μl培養液，在360～550nm波長處測定吸收值，作為粘附前細胞的吸收值；

2)測定粘附后細胞的吸收值

取測試溶液50μl，加小鼠脾細胞懸液50μl；將培養板于二氧化碳培養箱中，37℃孵化0.5～2小時，使細胞在培養板底部粘附；取出細胞培養板，振蕩15～120秒，將未粘附細胞搖起，吸出上清液；再加入培養液液50μl洗一次，將洗液與上清液合并，在360～550nm波長下測定吸收值，作為粘附后細胞的吸收值。

2、根據權利要求1所述的方法，其特征在于：測定吸收值的波長為405nm。

3、根據權利要求1所述的方法，其特征在于：所述培養液為含10％小牛血清的RPMI-1640培養液，用Hepes和碳酸氫鈉調節pH值至7.2～7.4。

4、根據權利要求1-3任一所述的方法，其特征在于：所述小鼠脾細胞懸液的密度為10³～10⁶細胞/ml。

5、根據權利要求4所述的方法，其特征在于：所述小鼠脾細胞懸液按如下過程制備：

將小鼠拉脫頸椎或放血而死，用碘酒、酒精處理皮毛，剪開皮膚，打開腹腔。在胃底部找到紅色的脾，用鑷子分離后摘除；脾經培養液洗滌后，置50～300目不銹鋼網上，用剪刀剪成數塊，用注射器柄擠壓研磨，1000r/min離心，懸起沉淀部分即得小鼠脾細胞懸液。