[發(fā)明專利]人CD40L表達(dá)體系及其制備方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710093083.3
• 申請(qǐng)日: 2007-11-30
• 公開（公告）號(hào): CN101200715A
• 公開（公告）日: 2008-06-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田坤;錢桂生
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 田坤
• 主分類號(hào): C12N15/09
• 分類號(hào): C12N15/09;C12N15/12;C12N15/79
• 代理公司: 重慶志合專利事務(wù)所
• 代理人: 胡榮琿

1.一種人CD40L表達(dá)體系，其特征在于該體系：

含真核啟動(dòng)子的表達(dá)載體；

編碼SEQ?ID?NO：1特異性人CD40L目的基因片段；

所述表達(dá)載體在多克隆位點(diǎn)與CD40L目的基因片段重組。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)體系，其特征在于所述的CD40L目的基因片段SEQID?NO：1的序列是NCBI核酸數(shù)據(jù)庫(kù)收錄的編號(hào)為BC071754?CD40L序列中所載取的40至915間基因序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)體系，其特征在于所述的表達(dá)載體含CMV和SV40真核啟動(dòng)子。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)體系，其特征在于所述的表達(dá)載體在多克隆位點(diǎn)具有Nhe?I和Kpn?I酶切位點(diǎn)。

5.根據(jù)權(quán)利要求1，3或4所述的表達(dá)體系，其特征在于所述的表達(dá)載體為pcDNA3.1(+)載體除去多克隆位點(diǎn)Nhe?I與Kpn?I之間16個(gè)堿基的載體部分。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的表達(dá)體系，其特征在于所述的CD40L目的基因片段是由人激活態(tài)T淋巴細(xì)胞中獲取。

7.一種制備權(quán)利要求1所述的人CD40L表達(dá)體系的方法，其特征在于包含以下步驟：

(1)CD40L目的基因的克隆；

(2)CD40L目的基因與pMD-18-T載體的重組克隆載體的構(gòu)建；

(3)pMD18-T-CD40L重組克隆載體的鑒定與純化；

(4)CD40L-表達(dá)載體的構(gòu)建；

(5)CD40L-表達(dá)載體重組陽性質(zhì)粒的鑒定與純化；

(6)CD40L-表達(dá)載體重組陽性質(zhì)粒轉(zhuǎn)染靶細(xì)胞株；

(7)靶細(xì)胞株中CD40L目的基因表達(dá)的檢測(cè)。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于CD40L目的基因的克隆引物為SEQ?ID?NO：2和SEQ?ID?NO：3的核苷酸序列。

9.根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于所述的SEQ?ID?NO：2所示序列的5’末端和pMD18-T載體分別設(shè)有酶切位點(diǎn)Nhe?I和Kpn?I。

10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述的CD40L-表達(dá)載體中的表達(dá)載體為pcDNA3.1(+)載體除去多克隆位點(diǎn)Nhe?I與Kpn?I之間16個(gè)堿基的載體部分。