[發(fā)明專(zhuān)利]基于線(xiàn)粒體DNA C3970T單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)高原肺水腫易感性的試劑盒

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710092822.7
• 申請(qǐng)日: 2007-10-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101135666A
• 公開(kāi)（公告）日: 2008-03-05
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 羅勇軍;高文祥;劉福玉;高鈺琪;黃慶愿;翟羽;蔣春華
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N27/447
• 分類(lèi)號(hào): G01N27/447;G01N21/64;G01N21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 重慶華科專(zhuān)利事務(wù)所
• 代理人: 徐先祿

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種疾病檢測(cè)用的試劑盒，具體涉及基于線(xiàn)粒體DNA?C3970T單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)高原肺水腫易感性的試劑盒。

背景技術(shù)

平原人進(jìn)入高原后將面臨因高原缺氧導(dǎo)致的急性高原病的威脅，特別是由于急性重癥高原病的發(fā)病率和病死率高，后果嚴(yán)重。高原肺水腫(highaltitude?pulmonary?edema，HAPE)是一種特發(fā)于高原低氧環(huán)境的肺水腫，起病急，進(jìn)展快，危害大，如果救治不及時(shí)，可在較短的時(shí)間內(nèi)發(fā)展至呼吸衰竭，甚至死亡，是嚴(yán)重威脅進(jìn)入高原人群健康和生命的急性重癥高原病。調(diào)查表明，在進(jìn)入海拔3700m以上高原的人群中，高原肺水腫的發(fā)病率高達(dá)0.4％-2％。HAPE發(fā)病的種族特異性以及家族和個(gè)體易感傾向提示，環(huán)境因素和遺傳因素均可以影響HAPE的發(fā)生，而機(jī)體對(duì)環(huán)境因素的易感性也受遺傳因素的影響。近年來(lái)，遺傳因素在HAPB發(fā)病機(jī)制中的作用逐漸受到重視【張雪峰，高原施工人群急性重型高原病患病率調(diào)查，高原醫(yī)學(xué)雜志，2005；15(3)：7-8；陳有，高原肺水腫發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展，高原醫(yī)學(xué)雜志，2005，15(2)：62-64；高鈺琪，高原肺水腫的發(fā)病機(jī)制及防治，人民軍醫(yī)，2005；482(2)：108-111】。

由于線(xiàn)粒體是動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)唯一含有DNA和蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的細(xì)胞器，是氧傳送鏈的生理終點(diǎn)站，是細(xì)胞氧耗的主要位點(diǎn)，是一個(gè)細(xì)胞氧易感性和適應(yīng)的自然選擇者，因此關(guān)于線(xiàn)粒體適應(yīng)的研究逐漸成為熱點(diǎn)(高文祥，低氧大鼠腦線(xiàn)粒體體外轉(zhuǎn)錄活性的研究，《中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志》2001；17：323-326)。HAPE是一種低氧習(xí)服不良的急性高原病，因而線(xiàn)粒體在HAPE的發(fā)生中發(fā)生著重要的作用。單核苷酸多態(tài)性(SNP)，是廣泛分布于人類(lèi)全基因組中穩(wěn)定的多態(tài)位點(diǎn)，代表了不同個(gè)體之間最大的遺傳差異。隨著人類(lèi)基因組計(jì)劃的進(jìn)展，人們愈來(lái)愈相信基因組中的這類(lèi)多態(tài)性有助于解釋個(gè)體的表型差異、不同群體和個(gè)體對(duì)疾病，特別是對(duì)復(fù)雜疾病的易感性、以及對(duì)各種藥物的耐受性和對(duì)環(huán)境因子的反應(yīng)。

LDR(連接酶檢測(cè)反應(yīng))是一種經(jīng)濟(jì)、快速的檢測(cè)SNP常用的方法，其檢測(cè)原理是：利用高溫連接酶實(shí)現(xiàn)對(duì)基因多態(tài)性位點(diǎn)的識(shí)別，高溫連接酶一旦檢測(cè)到DNA與互補(bǔ)的兩條寡聚核苷酸接頭對(duì)應(yīng)處存在著基因點(diǎn)突變類(lèi)型的堿基錯(cuò)配，則連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。測(cè)序分型原理如下：

(1)本技術(shù)方案先通過(guò)PCR(聚合酶鏈反應(yīng))獲得含有待檢測(cè)突變位點(diǎn)的基因片斷，然后進(jìn)行LDR，最后通過(guò)測(cè)序儀電泳讀取檢測(cè)結(jié)果；

(2)檢測(cè)結(jié)果表明，左邊位點(diǎn)，即突變位點(diǎn)一為A/C雜合子，右邊位點(diǎn)，即突變位點(diǎn)二為T(mén)純合子(見(jiàn)圖1)。

LDR與傳統(tǒng)的SNP分型手段相比，LDR技術(shù)有多項(xiàng)優(yōu)勢(shì)：

(1)準(zhǔn)確度高：與PCR等技術(shù)的假陰性假陽(yáng)性相比，LDR技術(shù)可以比較準(zhǔn)確的對(duì)SNP進(jìn)行分型；

(2)操作簡(jiǎn)單：和目前的PCR技術(shù)相似，LDR反應(yīng)操作簡(jiǎn)單，對(duì)技術(shù)人員沒(méi)有特殊的專(zhuān)業(yè)要求；

(3)成本低：使用LDR檢測(cè)系統(tǒng)只需現(xiàn)有的PCR儀等分子實(shí)驗(yàn)室儀器即可，無(wú)需再投入大量的資金購(gòu)置設(shè)備；

(4)通用性強(qiáng)：成熟的LDR檢測(cè)系統(tǒng)適用于各種SNP位點(diǎn)的分型；

(5)高通量：LDR檢測(cè)系統(tǒng)可同時(shí)對(duì)多達(dá)上百個(gè)SNP位點(diǎn)進(jìn)行分型，檢測(cè)效率高，滿(mǎn)足復(fù)雜疾病及藥物基因組學(xué)的診斷需求。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種基于線(xiàn)粒體DNA?C3970T單核苷酸多態(tài)性檢測(cè)高原肺水腫易感性的試劑盒，能用于高原肺水腫(簡(jiǎn)稱(chēng)HAPE)易感者的篩選，指導(dǎo)HAPE的預(yù)防。