[發明專利]基于線粒體DNA C3970T單核苷酸多態性檢測高原肺水腫易感性的試劑盒

無效

• 申請號: 200710092822.7
• 申請日: 2007-10-01
• 公開（公告）號: CN101135666A
• 公開（公告）日: 2008-03-05
• 發明（設計）人: 羅勇軍;高文祥;劉福玉;高鈺琪;黃慶愿;翟羽;蔣春華
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍第三軍醫大學
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N21/64;G01N21/00;C12Q1/68
• 代理公司: 重慶華科專利事務所
• 代理人: 徐先祿

1.基于線粒體DNA?C3970T單核苷酸多態性檢測高原肺水腫易感性的試劑盒，其特征是該試劑盒包括以下分離包裝的試劑：

試劑一，引物混合液，序列如下：

上游引物HP6-F：5’-ACGTTGCCGAAGGGGAGTCCGAACT-3’；

下游引物HP6-R：5’-GTTCAGGGGAGAGTGCGTCAAATGTTGTTC-3’；

試劑二，PCR反應混合液；

試劑三，3970位點單核苷酸多態性C對照DNA；

試劑四，3970位點單核苷酸多態性T對照DNA；

試劑五，探針混合液，三種探針序列如下：

①P6-F：

5’-GGCGAAGGGGCCTGCGGCGTATTCGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，為熒光物FAM標記；

②P6-D1：線粒體DNA的3970位點為單核苷酸多態性C：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTAT?TCGGCTATGAAGAATAG-3’；

③P6-D2：線粒體DNA的3970位點為單核苷酸多態性T：

5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGTGTATTCGGCTATGAAGAATAA-3’；

試劑六，連接反應混合液；

試劑七，電泳混合液。

2.根據權利要求1所述的基于線粒體DNA?C3970T單核苷酸多態性檢測高原肺水腫易感性的試劑盒，其特征是：

試劑一，引物混合液100μl；上游引物和下游引物各50μl混合，濃度均為10pmol/μl；

試劑二，PCR反應混合液1000μl；成分有1×PCR?buffer，2.0mMMgCl₂，200mM?dNTPs，1?U?Taq酶，余量為蒸餾水；

試劑三，線粒體DNA的3970位點單核苷酸多態性C對照DNA?50μl，濃度為50ng/μl；

試劑四，線粒體DNA的3970位點單核苷酸多態性T對照DNA?50μl，濃度為50ng/μl；

試劑五，探針混合液120μl，三種探針各40μl混合，該三種探針濃度均為12.5pmol/ul；

試劑六，連接反應混合液100μl；成分有pH7.6的20mM?Tris-HCl，25mM醋酸鉀，10mM醋酸鎂，10mM二硫蘇糖醇，1mM氧化型輔酶I，0.1％TritonX-100，0.5μl?Taq?DNA連接酶，余量為蒸餾水；

試劑七，電泳混合液100μl；熒光物質1×ROX和上樣緩沖液6×loadingbuffer各為50μl。