[發(fā)明專利]基于線粒體DNA G5351A單核苷酸多態(tài)性檢測高原肺水腫易感性的試劑盒無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200710092815.7 | 申請日： | 2007-10-01 |
| 公開（公告）號： | CN101470095A | 公開（公告）日： | 2009-07-01 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 高鈺琪;羅勇軍;高文祥;黃慶愿;陳建;劉福玉;譚小玲;周其全 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué) |
| 主分類號： | G01N27/447 | 分類號： | G01N27/447;G01N21/64;G01N21/00;C12Q1/68 |
| 代理公司： | 重慶華科專利事務(wù)所 | 代理人： | 徐先祿 |
| 地址： | 400038重*** | 國省代碼： | 重慶;85 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 基于 線粒體 dna g5351a 核苷酸 多態(tài)性 檢測 高原 肺水腫 感性 試劑盒 | ||
1.基于線粒體DNA?G5351A單核苷酸多態(tài)性檢測高原肺水腫易感性的試劑 盒，其特征是該試劑盒包括以下分離包裝的試劑：
試劑一，引物混合液100μl；上游引物和下游引物各50μl混合，濃度均 為10pmol/μl，序列如下：
上游引物HP3-F：5’-CACCATCATAGCCACCATCA-3’；
下游引物HP3-R：5’-GTTGATGCAGAGTGGGGTTT-3’；
試劑二，PCR反應(yīng)混合液1000μl；成分有1×PCR?buffer，2.0mMMgCl2，200 mM?dNTPs，1?U?Taq酶，余量為蒸餾水；
試劑三，線粒體DNA的5351位點單核苷酸多態(tài)性G對照DNA?50μl，濃度為 50ng/μl；
試劑四，線粒體DNA的5351位點單核苷酸多態(tài)性A對照DNA?50μl，濃度為 50ng/μl；
試劑五，探針混合液120μl；三種探針各40μl混合，該三種探針濃度均 為12.5pmol/ul，三種探針序列如下：
①P3-F：
5’-P-AGGTAGAAGTAGAGGTTAAGGAGGGTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT-3’，為熒光 物FAM標記；
②P3-D1：線粒體DNA的5351位點多態(tài)性A：
5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATTGAGGTGGAGTAGATTTGGCGT-3’；
③P3-D2：線粒體DNA的5351位點多態(tài)性G：
5’-TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTGATTGAGGTGGAGTAGATTTGGCGC-3’；
試劑六，連接反應(yīng)混合液100μl；成分有pH?7.6的20mM?Tris-HCl，25mM 醋酸鉀，10mM醋酸鎂，10mM二硫蘇糖醇，1mM氧化型輔酶I，0.1％Triton X-100，0.5μl?Taq?DNA連接酶，余量為蒸餾水；
試劑七，電泳混合液100μl；熒光物質(zhì)i×ROX和上樣緩沖液6×loading buffer各為50μl。
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