[發明專利]基于積分球增強光散射檢測技術的均相親和分析新方法

無效

• 申請號: 200710092738.5
• 申請日: 2007-09-24
• 公開（公告）號: CN101178360A
• 公開（公告）日: 2008-05-14
• 發明（設計）人: 廖飛;陸巍;謝國明;鄧萍;楊曉蘭;于明安
• 申請（專利權）人: 重慶醫科大學
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64;G01N33/48
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明意在用熒光分光光度計等測量光致發光信號的儀器，通過本身為多活性位點的生物分子或所制備的多活性位點加合物，與帶強散射能力或能產生熒光共振能量轉移效應的生色團所標記的對應生物活性成分相結合，生成有強散射能力或熒光共振能量轉移效應的非共價產物復合物(團聚物)，聯用積分球增強發光信號測量比例的光信號檢測技術，建立一種不需分離出產物復合物的均相親和分析新方法，可用于免疫分析和配體類藥物的離體篩選。

本發明所述方法是一種表征單活性位點或多活性位點生物分子同其它生物活性成分相互作用的通用方法。生物分子所含活性位點的數目取決于與其發生相互作用生物活性成分的結合性質。通常單一肽鏈蛋白也可有多個不同的抗原決定簇。當用針對特定抗原決定簇的單抗與蛋白抗原結合時，單一肽鏈蛋白大多為單活性位點的生物分子；當用多克隆抗體或多個單抗與之結合時，單一肽鏈蛋白也可成為多活性位點的生物分子；而基本沒有對稱性的簡單小分子半抗原或配體類藥物，通常為單活性位點的生物分子。

背景技術

生物活性分子可通過非共價鍵相互作用特異結合成非共價產物復合物。只要生物分子之間結合的親和力足夠高，反應達到平衡后，相互結合成分量的變化也有明確的化學計量關系。因此，利用這類高選擇性結合反應，可測定混合物中生物活性成分的含量或生物分子之間相互作用的親和力，此即親和分析，其典型代表是免疫分析和配體類藥物的離體篩選。

在親合分析的結合反應過程中，物質都沒有共價鍵的變化，通常難測量吸收、熒光等信號的變化確定所生成的非共價產物復合物量。為了便于用常用儀器測量所生成的非共價產物復合物或未結合成分的量，常需將親和分析中的待測成分標準品或與其結合的對應生物活性成分，用帶有便于檢測信號的物質(如放射性同位素或酶)進行標記，然后通過測定非共價產物復合物中或剩余的未結合成分中的標記信號強度，直接或間接確定非共價產物復合物的量。

但采用這類對結合反應中的某個成分進行標記的策略面臨一個問題：如何選擇性測定未結合的帶標記成分量或產物復合物量。解決此問題的最簡單策略是將非共價產物復合物從反應混合物中分離出來后再定量。因此，使用這類標記親和分析方法，按是否需分離出非共價產物復合物再定量，分成非均相親和分析和均相親和分析兩種。非均相親和分析需分離出產物復合物再定量，而均相親和分析則不需分離出非共價產物復合物就可直接定量。均相親和分析方法效率更高、干擾更少、操作更簡便，對于免疫分析和配體藥物離體篩選更有價值。但均相親和分析方法很難建立，目前實用的親和分析技術主要是采用標記的非均相親和分析方法。另外，按照分析策略的差異，使用標記的親和分析又分成直接親合分析和競爭性親合分析。直接親合分析用帶標記的過量生物活性成分與待測成分反應，達到平衡后分離出非共價產物復合物或未結合的帶標記成分進行定量。競爭性親合分析中，將待測成分的標準品用適當方法進行標記后，將設定量的被標記標準品與待測樣品混勻后競爭結合對應的生物活性成分，達到平衡后將非共價產物復合物與未結合的被標記標準品盡可能完全地分離后再進行定量。現有親和分析方法都依賴于這兩種策略表征生物分子之間的相互作用。

只有直接測定親和分析反應混合物中的非共價產物復合物的量或剩余未結合生物活性成分量，才能建立均相親和分析方法。現有常用測量技術中，能滿足此要求的主要有兩種方法：光散射檢測技術和熒光共振能量轉移技術。

光散射是指體系中的顆粒在激發光照射下，在顆粒周圍除了激發光傳播方向以外都能檢測到光信號的現象。體積越大的顆粒對激發光的散射作用越強。在親合分析的結合反應過程中，所生成的非共價產物復合物的體積都比未結合成分的體積大，故隨著親和分析反應體系中非共價產物復合物的生成，反應體系的光散射信號就會增高。所以，基于光散射檢測技術可建立均相親和分析方法，其代表是免疫比濁法。但是，現有免疫比濁法靈敏度低，局限于測定細菌等體積較大的物質，還不能成為一種通用的均相親和分析方法。