[發(fā)明專(zhuān)利]中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白及其多克隆抗體的制備方法

無(wú)效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710089246.0
• 申請(qǐng)日: 2007-03-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN101050459A
• 公開(kāi)（公告）日: 2007-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張杰;劉永生;路偉;孫德惠;陳豪泰;劉湘濤;才學(xué)鵬
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所
• 主分類(lèi)號(hào): C12N15/09
• 分類(lèi)號(hào): C12N15/09;C12N15/12;C07K14/47;G01N33/68;C07K16/18;G01N33/53
• 代理公司: 蘭州振華專(zhuān)利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 張晉

1、一種中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的制備方法，其特征在于用中國(guó)黃牛外周血的DNA為模板，根據(jù)中國(guó)黃牛疊朊蛋白編碼基因Prnd的開(kāi)放閱讀框序列，設(shè)計(jì)一對(duì)引物進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，得到中國(guó)黃牛成熟的疊朊蛋白編碼基因，再將所得到的疊朊蛋白編碼基因與原核表達(dá)載體連接，將中國(guó)黃牛的疊朊蛋白編碼基因插在表達(dá)載體多克隆位點(diǎn)NdeI和XhoI之間，構(gòu)建出重組表達(dá)質(zhì)粒，將重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)入原核宿主細(xì)胞得到表達(dá)菌株，再對(duì)表達(dá)載產(chǎn)物進(jìn)行分離和純化得到目的蛋白。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的制備方法，其特征在于所用原核表達(dá)載體為pET-30a(+)，所用的原核宿主細(xì)胞為大腸桿菌BL21(DE3)，并在異丙基硫代半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)下進(jìn)行。

3、一種中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白，其特征是用權(quán)利要求1或2所述的方法制備。

4、權(quán)利要求3所述的中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的用途，其特征在于用于制備檢測(cè)疊朊蛋白存在或/和研究中國(guó)黃牛疊朊蛋白的試劑。

5、中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的多克隆抗體的制備方法，用權(quán)利要求1或2所述的方法制備的疊朊蛋白在哺乳動(dòng)物的皮下注射進(jìn)行多次免疫，收集被免疫動(dòng)物的血液并制備血清，所得血清即為所需要的抗體。

6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的多克隆抗體的制備方法，其特征在于所用的免疫動(dòng)物為兔。

7、中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的多克隆抗體，其特征是用權(quán)利要求6所述的方法制備。????

8、權(quán)利要求7所述的中國(guó)黃牛成熟疊朊蛋白的多克隆抗體的用途，其特征是用于檢測(cè)疊朊蛋白存在或/和研究中國(guó)黃牛疊朊蛋白的試劑。