[發(fā)明專利]乳中農(nóng)藥殘留的快速檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710085390.7
• 申請日: 2007-03-02
• 公開（公告）號: CN101059423A
• 公開（公告）日: 2007-10-24
• 發(fā)明（設計）人: 李翠枝;王彥娟;劉麗君
• 申請（專利權）人: 內(nèi)蒙古伊利實業(yè)集團股份有限公司
• 主分類號: G01N21/25
• 分類號: G01N21/25;G06F19/00
• 代理公司: 呼和浩特北方科力專利代理有限公司
• 代理人: 何淑珍

技術領域：

本發(fā)明涉及一種農(nóng)藥殘留的快速檢測方法，尤其是涉及一種動物乳與乳制品中農(nóng)藥殘留的快速檢測方法。

背景技術：

在食品安全日益關注的今天，嚴格控制產(chǎn)品質(zhì)量，避免由于藥物殘留對食品的影響，成為質(zhì)量控制的關注焦點。然而農(nóng)藥做為食品的重要污染源，由于它的大多數(shù)品種用于防治農(nóng)業(yè)有害生物，所以對人體有較大毒害性。進入人體的農(nóng)藥，如果超過了正常人的最大耐受限量，將會導致機體的正常生理功能的失調(diào)，引起病理改變和毒性危害，因此食品中農(nóng)藥殘留問題也應該得到足夠的重視。

在我國乳制品消費量日益增長的趨勢下，嚴格控制乳制品(奶)的質(zhì)量，對整個乳制品質(zhì)量安全起到關鍵的作用。因此，尋找一種靈敏度較好的動物乳中農(nóng)藥殘留的快速檢測方法對于企業(yè)的食品安全性有著重要的意義。

目前，在農(nóng)藥殘留快速檢測方法的開發(fā)中，酶抑制法是研究最多且相對成熟的一種。由于有機磷與氨基甲酸酯化合物為神經(jīng)系統(tǒng)乙酰膽堿脂酶的不可逆抑制劑，對人具有較高的毒性，酶抑制法是對部分農(nóng)藥進行殘留快速檢測的技術。有機磷、氨基甲酸酯類農(nóng)藥在總農(nóng)藥用量中占很大比重。有超過100種的有機磷農(nóng)藥在世界范圍內(nèi)應用，中國常用的農(nóng)藥中，甲胺磷、久效磷、對硫磷、甲基對硫磷、甲拌磷、氧樂果等高毒農(nóng)藥占總農(nóng)藥用量的一半以上。因此，酶抑制法的農(nóng)藥殘留快速測定的應用有極大的現(xiàn)實意義。依據(jù)酶抑制設計的農(nóng)藥殘留速測技術都是應用于水果蔬菜的農(nóng)藥殘留測定，目前還沒有應用于基質(zhì)相對復雜的牛乳中，在此，我們將這些方法開發(fā)應用于牛乳的農(nóng)藥殘留測定。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明提供一種乳制品檢測領域的一種新方法，具體為乳制品中農(nóng)藥殘留的快速檢測方法-酶抑制率法，該方法的原理為：以碘化硫代乙酰膽堿(ATCI)為底物，二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)為顯色劑，使樣品的提取液與膽堿酯酶作用，經(jīng)一定時間反應后，根據(jù)產(chǎn)生黃色物質(zhì)的程度，利用酶標儀在420-430nm波長下比色，優(yōu)選在425nm波長下比色。由吸光值的變化計算膽堿酯酶的抑制率，從而判斷有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留情況。

本發(fā)明的檢測方法包括如下步驟：

1).取檢驗樣品與丙酮混合，振搖，靜置10-30分鐘，出現(xiàn)上清液即可；在該步驟中，檢驗樣品與丙酮二者之間的比例沒有特定的限制，本領域普通技術人員可根據(jù)檢測限來調(diào)整二者之間的比例；

2).取5-10ml上清液(視上清液析出情況可適當調(diào)整取樣量)置于比色管中，通入氮氣，濃縮至沒有溶劑即可；

3).給上述比色管中加入2-4mL?pH＝7.0-8.0的緩沖液，再加入40-60μL膽堿酯酶+40-60μL顯色劑二硫代-二硝基苯甲酸(DTNB)，優(yōu)選分別加入50μL的上述酶和顯色劑；同時做除不加樣品外其它處理步驟均與檢樣組相同的對照組；

4).置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)10-30分鐘，優(yōu)選培養(yǎng)30分鐘；

5).從恒溫培養(yǎng)箱中取出培養(yǎng)物，加入40-60μL碘化硫代乙酰膽堿(ATCI、底物)，優(yōu)選加入50μL該底物；

6).振搖反應，然后移入酶標板或比色皿中，在420-430nm波長下，應用酶標儀或分光光度計測定吸光度，優(yōu)選在425nm下檢測；

7).由吸光度值的變化計算膽堿酯酶的抑制率

其中：

對照組吸光度差為對照溶液反應3分鐘吸光度的變化值；

樣本吸光度差為樣品溶液反應3分鐘吸光度的變化值；

8)結果判定：

結果以酶被抑制的程度(抑制率)表示。

當檢測樣品對酶的抑制率≥50％時，表示樣品為陽性

在本發(fā)明的檢測方法中，可使用的緩沖液為優(yōu)選pH＝8.0的磷酸鹽緩沖液。

在本發(fā)明的檢測方法中，樣品提取采用的丙酮優(yōu)選為分析純的。

在本發(fā)明的檢測方法中，可采用本領域已知的常規(guī)儀器設備，例如，可選用如下儀器設備：

移液槍，50μL-200μL；酶標儀(美國Thermo?MK3)；打印機(Star?HL-10)；10μL、100μL、250μL微量進樣器；全溫氣候箱(MLR-350H)；生化培養(yǎng)箱(LRH-250-II微電腦控制廣東省醫(yī)療器械廠)；空白酶標板；10mL比色管。

本發(fā)明的檢測方法，優(yōu)選地對如下農(nóng)藥的檢測靈敏度相對較高：Dichlorvos(敵敵畏)；Methamidophos(甲胺磷)；Monocrotophos(久效磷)；Methidathion(殺撲磷)。上述幾種農(nóng)藥標準樣品都購于美國ChemService公司。