[發明專利]一種淡水魚類肝吸蟲快速免疫檢測試劑盒和檢測方法

有效

• 申請號: 200710076976.7
• 申請日: 2007-09-11
• 公開（公告）號: CN101387641A
• 公開（公告）日: 2009-03-18
• 發明（設計）人: 胡紹良;饒樂
• 申請（專利權）人: 深圳市康百得生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/535
• 代理公司: 深圳市君勝知識產權代理事務所
• 代理人: 劉文求

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，尤其涉及的是，一種淡水魚類肝吸蟲 快速免疫檢測試劑盒和檢測方法。

背景技術

肝吸蟲是一種常見人體寄生蟲，通過食入含有肝吸蟲囊蚴的淡水魚類 而感染。肝吸蟲成蟲寄生于人體肝臟膽管內，導致肝吸蟲病，引起一系列 的肝膽損害，包括膽管炎癥、結石、膽汁性肝硬化，最終可以誘發肝癌。

目前對人體肝吸蟲病的診斷方法很多，包括病原學方法檢查糞便蟲卵 和免疫學方法檢測病人血清中肝吸蟲抗體。病原學方法準確可靠，但蟲卵 小，排卵不規律，容易漏診，而且要采集病人糞便，用清水反復沉淀并淘 洗多次，取沉渣，之后由專業技術人員用高倍顯微鏡檢查，過程較長，一 般需幾個小時或更多，操作煩瑣不便，耗費人工，難以推廣普查；免疫學 方法敏感特異，方便快速，檢測血清即可，因此，得到較為廣泛的應用。

在免疫學方法中，酶聯免疫檢測技術應用最為普遍，國內在20世紀90 年代就成功開發了用于檢測人體內肝吸蟲的快速免疫檢測試劑盒(胡紹良 等，華支睪吸蟲病快速ELISA診斷試劑盒的建立，中國寄生蟲病防治雜志， 1995年8卷4期，起止頁碼：295-296)，敏感性達到92％以上，特異性達 到98％以上。

然而，要真正切斷肝吸蟲流行，保障人民健康，必須從源頭上對淡水 魚肉品進行安全監督，防止含有肝吸蟲囊蚴的病魚流入市場。但目前對淡 水魚肝吸蟲檢測還缺乏有效手段。傳統的魚類肝吸蟲檢查，是采用顯微鏡 對魚肉中的肝吸蟲囊蚴進行觀測，但這種方法要在一般重達1000克的魚肉 中，肉眼觀察到不足1毫米的囊蚴是非常困難的，不僅效率低下，而且極 易發生遺漏。因此，顯微鏡檢查魚肉，查肝吸蟲，除了科學研究外，幾乎 沒有在實際中得到應用，這也是造成淡水魚肝吸蟲缺乏安全監督的重要原 因。而淡水魚肝吸蟲免疫檢測方法迄今也未建立。

因此，現有技術沒有檢測淡水魚類肝吸蟲的有效工具。

發明內容

本發明的目的在于提供一種淡水魚類肝吸蟲快速免疫檢測試劑盒和檢 測方法，從而提供一種檢測淡水魚類肝吸蟲的檢測工具和方法。

本發明的技術方案如下：

一種淡水魚類肝吸蟲快速免疫檢測試劑盒，其盒體內設置酶聯反應板、 酶結合物、洗滌液、底物液、顯色劑、稀釋液、終止液；其中，所述酶聯 反應板為從肝吸蟲中提取可溶性抗原并純化，然后包被所述可溶性抗原制 得的酶聯反應板；所述酶結合物為辣根過氧化酶標記抗魚免疫球蛋白的酶 結合物。

所述的試劑盒，其中，所述酶聯反應板是在通用聚苯乙烯微孔板上包 被可溶性抗原，然后在室溫靜置12～24小時，冷凍真空干燥后裝袋封口制 成；其中，所述可溶性抗原是從感染動物中獲取肝吸蟲成蟲，并提取得到 其可溶性抗原；包被液為含0.01％～1％可溶性抗原的緩沖液，所述緩沖液 是0.01mol/L～0.15mol/L的磷酸鹽、硼酸鹽或碳酸鹽緩沖液，pH7.5～ pH9.5。

所述的試劑盒，其中，所述酶結合物為采用純化的魚免疫球蛋白免疫 動物，分離出抗魚免疫球蛋白，經純化后采用辣根過氧化酶進行免疫標記 制成。

所述的試劑盒，其中，所述酶結合物是含0.05％～1％的辣根過氧化物 酶標記抗魚免疫球蛋白的0.01mol/L～0.05?mol/L磷酸鹽緩沖液，pH6～8； 并且添加含量足以抑制細菌生長的防腐劑。

所述的試劑盒，其中，其還至少包括陰性對照品、陽性對照品其中之 一。

所述的試劑盒，其中，所述洗滌液為包含有0.1％～1％表面活性劑的 0.01mol/L～0.5mol/L磷酸鹽緩沖液，pH6～8；底物液為0.1％～0.5％過氧化 氫溶液；顯色劑為3，3’，5，5’-四甲基聯苯胺；稀釋液為0.01mol/L～0.5mol/L 磷酸鹽緩沖液，pH6～8；終止液為1mol/L～2mol/L的硫酸或氫氧化鈉。

一種用于權利要求1所述的試劑盒的檢測方法，其包括步驟：

A1、從感染動物中獲取肝吸蟲成蟲，并提取得到其可溶性抗原，在通 用聚苯乙烯微孔板上包被所述可溶性抗原，然后在室溫靜置12～24小時， 冷凍真空干燥后制成酶聯反應板，并裝袋封口保存；其中，包被液是含有 0.01％～1％所述可溶性抗原的緩沖液，所述緩沖液是pH7.5～pH9.5的0.01 mol/L～0.15mol/L的磷酸鹽、硼酸鹽或碳酸鹽緩沖液；