[發明專利]一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法

無效

• 申請號: 200710074961.7
• 申請日: 2007-06-14
• 公開（公告）號: CN101100660A
• 公開（公告）日: 2008-01-09
• 發明（設計）人: 鄒水洋;吳清林;鄧韻;王尚武
• 申請（專利權）人: 東莞理工學院
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N1/14
• 代理公司: 深圳市順天達專利商標代理有限公司
• 代理人: 蔣海燕

1.一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于將康寧木霉與米根霉兩種微生物接種于固態或液態發酵培養基中，采用固態發酵工藝或液態發酵工藝，混合培養生產纖維素酶。通過控制兩種微生物的生物量等培養條件來提高纖維素酶的活力，并改善酶系的組成。

2.如權利要求1所述的一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述的固態發酵工藝的步驟是：

(1)液體制種：選擇菌種康寧木霉和米根霉為生產菌株，分別經斜面試管培養、搖瓶擴大培養(或發酵罐再擴大培養)制備所需二級液體菌種；

(2)將康寧木霉和米根霉的斜面菌種制成孢子懸浮液，每毫升孢子數為10⁷～10⁸個，以2～10∶1的體積比例混合，按固態發酵培養基重量的6～14％接種；或將康寧木霉和米根霉的二級液體菌種，以2～10∶1的體積比例混合，按固態發酵培養基重量的6～14％接種。接種后在25～35℃、空氣相對濕度70～90％下培養72～144小時，30～48小時翻曲一次，即成固體酶曲；

(3)將固體酶曲按1∶8～10的重量比加水浸泡1～4小時后過濾，過濾液即為纖維素酶的提取液；

(4)將上述提取液濃縮至原來體積的2/10～4/10可制成高活性液態纖維素酶制劑，濃縮液經噴霧干燥可制成粉狀高活性纖維素酶制劑。

3.如權利要求1所述的一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述的液態發酵工藝的步驟是：

(1)液體制種：選擇菌種康寧木霉和米根霉為生產菌株，分別經斜面試管培養、搖瓶擴大培養(或發酵罐再擴大培養)制備所需二級液體菌種；

(2)先將康寧木霉的二級液體菌種，按液態發酵培養基體積的1～9％接種量接種于液態發酵培養基，20～35℃下通氣培養24～72小時后，再接種1～9％體積的米根霉二級液體菌種，20～35℃下繼續通氣培養24～96小時，將培養液過濾，過濾液即為原酶液；

(3)將上述原酶液濃縮至原來體積的2/10～3/10即為高活性液態纖維素酶制劑，濃縮液經噴霧干燥可制成粉狀高活性纖維素酶制劑。

4.如權利要求2所述的一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述的固態發酵工藝中的固態發酵培養基的制備方法是：稻草粉、蔗渣粉、麩皮粉、小麥秸稈粉等天然纖維素原料或經過物理、化學方法預處理的纖維素原料或純纖維素粉中的一種或一種以上，與1～3倍重量Mandels營養液混合，調節pH4.5～5.0，110～121℃高壓蒸汽滅菌20～30分鐘。

5.如權利要求3所述的一種微生物混合發酵生產纖維素酶的方法，其特征在于，所述的液態發酵工藝中的液態發酵培養基的制備方法是：稻草粉、蔗渣粉、麩皮粉、小麥秸桿粉等天然纖維素原料或經過物理、化學方法預處理的纖維素原料或純纖維素粉中的一種或一種以上，共1～5份，加入100份Mandels營養液，調節pH4.5～5.0，裝入自動發酵罐，110～121℃高壓蒸汽滅菌15～30分鐘。