[發(fā)明專利]一種微生物混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710074961.7
• 申請日: 2007-06-14
• 公開（公告）號: CN101100660A
• 公開（公告）日: 2008-01-09
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 鄒水洋;吳清林;鄧韻;王尚武
• 申請（專利權(quán)）人: 東莞理工學(xué)院
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N1/14
• 代理公司: 深圳市順天達(dá)專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 蔣海燕

1.一種微生物混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于將康寧木霉與米根霉兩種微生物接種于固態(tài)或液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基中，采用固態(tài)發(fā)酵工藝或液態(tài)發(fā)酵工藝，混合培養(yǎng)生產(chǎn)纖維素酶。通過控制兩種微生物的生物量等培養(yǎng)條件來提高纖維素酶的活力，并改善酶系的組成。

2.如權(quán)利要求1所述的一種微生物混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于，所述的固態(tài)發(fā)酵工藝的步驟是：

(1)液體制種：選擇菌種康寧木霉和米根霉為生產(chǎn)菌株，分別經(jīng)斜面試管培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)(或發(fā)酵罐再擴(kuò)大培養(yǎng))制備所需二級液體菌種；

(2)將康寧木霉和米根霉的斜面菌種制成孢子懸浮液，每毫升孢子數(shù)為10⁷～10⁸個，以2～10∶1的體積比例混合，按固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量的6～14％接種；或?qū)⒖祵幠久购兔赘沟亩壱后w菌種，以2～10∶1的體積比例混合，按固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基重量的6～14％接種。接種后在25～35℃、空氣相對濕度70～90％下培養(yǎng)72～144小時，30～48小時翻曲一次，即成固體酶曲；

(3)將固體酶曲按1∶8～10的重量比加水浸泡1～4小時后過濾，過濾液即為纖維素酶的提取液；

(4)將上述提取液濃縮至原來體積的2/10～4/10可制成高活性液態(tài)纖維素酶制劑，濃縮液經(jīng)噴霧干燥可制成粉狀高活性纖維素酶制劑。

3.如權(quán)利要求1所述的一種微生物混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于，所述的液態(tài)發(fā)酵工藝的步驟是：

(1)液體制種：選擇菌種康寧木霉和米根霉為生產(chǎn)菌株，分別經(jīng)斜面試管培養(yǎng)、搖瓶擴(kuò)大培養(yǎng)(或發(fā)酵罐再擴(kuò)大培養(yǎng))制備所需二級液體菌種；

(2)先將康寧木霉的二級液體菌種，按液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基體積的1～9％接種量接種于液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基，20～35℃下通氣培養(yǎng)24～72小時后，再接種1～9％體積的米根霉二級液體菌種，20～35℃下繼續(xù)通氣培養(yǎng)24～96小時，將培養(yǎng)液過濾，過濾液即為原酶液；

(3)將上述原酶液濃縮至原來體積的2/10～3/10即為高活性液態(tài)纖維素酶制劑，濃縮液經(jīng)噴霧干燥可制成粉狀高活性纖維素酶制劑。

4.如權(quán)利要求2所述的一種微生物混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于，所述的固態(tài)發(fā)酵工藝中的固態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法是：稻草粉、蔗渣粉、麩皮粉、小麥秸稈粉等天然纖維素原料或經(jīng)過物理、化學(xué)方法預(yù)處理的纖維素原料或純纖維素粉中的一種或一種以上，與1～3倍重量Mandels營養(yǎng)液混合，調(diào)節(jié)pH4.5～5.0，110～121℃高壓蒸汽滅菌20～30分鐘。

5.如權(quán)利要求3所述的一種微生物混合發(fā)酵生產(chǎn)纖維素酶的方法，其特征在于，所述的液態(tài)發(fā)酵工藝中的液態(tài)發(fā)酵培養(yǎng)基的制備方法是：稻草粉、蔗渣粉、麩皮粉、小麥秸桿粉等天然纖維素原料或經(jīng)過物理、化學(xué)方法預(yù)處理的纖維素原料或純纖維素粉中的一種或一種以上，共1～5份，加入100份Mandels營養(yǎng)液，調(diào)節(jié)pH4.5～5.0，裝入自動發(fā)酵罐，110～121℃高壓蒸汽滅菌15～30分鐘。