[發明專利]男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒及檢測方法無效

申請號：	200710074317.X	申請日：	2007-05-10
公開（公告）號：	CN101092648A	公開（公告）日：	2007-12-26
發明（設計）人：	田潔;任維;向筑;廖生赟;鄒耀東	申請（專利權）人：	亞能生物技術（深圳）有限公司
主分類號：	C12Q1/68	分類號：	C12Q1/68;C12N15/11
代理公司：	深圳市博銳專利事務所	代理人：	張明
地址：	518057廣東省深圳市高***	國省代碼：	廣東;44
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摘要：
搜索關鍵詞：	男性染色體缺失基因檢測試劑盒方法
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【說明書】：

技術領域

本發明涉及基因缺失檢測領域，尤其涉及一種男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒及檢測方法。

背景技術

全世界約有15％的夫婦被不育所困擾，其中男性因素約占一半。在排除輸精管梗阻、克氏癥和其他泌尿生殖系統原因后，嚴重少精癥和無精子癥最有可能的原因就是精子發生基因的異常。關于精子發生基因，特別關注Y染色體長臂11間隔。Y染色體構成人類基因組的2％，??由短臂(Yp)和長臂(Yq)組成。無精子癥和嚴重少精子癥的細胞遺傳學和分子生物學研究也證實Y染色體上存在著無精子因子(azoospermia?factor，AZF)，它有四個清楚的、非重疊的亞區，即AZFa、AZFb、AZFc和AZFd區。這些區域的基因微缺失可引起精子發生障礙，繼而引起男性不育。因此Y染色體微缺失現在被認為是男性特發性不育最重要的遺傳學病因。隨著輔助生殖技術的進展，卵細胞胞漿內精子注射(intracytoplasmic?sperm?injection，ICSI)技術被認為是男性不育癥治療上的一次革命。然而該技術可能將攜帶染色體畸形、缺失或基因突變的精子注入到卵胞漿內，使卵子受精，從而將上述各種遺傳缺陷傳給下一代。因此，為了確定是否需要治療，臨床醫生建議所以精子濃度＜5×10⁶/mL的男性都要進行Y染色體微缺失的分子診斷。

AZF的片段較小，常規核型分析不易發現其缺失，故一般通過對STSs進行PCR擴增來獲取Y染色體微缺失信息。常用的技術有：

1.多重PCR電泳：多重PCR是目前Y染色體微缺失檢測應用得最廣泛的方法，具有簡單、快速、靈敏、特異、經濟和高通量的特點，是檢測AZF的理想方法，但與常規PCR相比有更高的技術要求，且缺少標準篩查方案，各實驗室結果不盡相同。

2.探針技術：用特異探針進行Southern?blot或Northern?blot是研究AZF微缺失與男性不育關系的有效方法，但方法過于繁瑣，難以推廣，多用于實驗室研究。

3.其他：(1)基因芯片技術：個別報道用基因芯片技術同時對多個熱點基因進行研究，有助于篩選和研究無精子癥相關基因，詳盡了解無精子癥的發病機制。(2)毛細管電泳技術：具有高通量、高靈敏度、快速及進樣量少的優點，但需要專門的毛細管電泳儀。

中國專利200410043918.0公開了特異性擴增Y染色體上微缺失STS中的sY87和sY143的兩對引物序列，但作為Y染色體微缺失檢測方法，不符合歐洲生殖學會檢測至少6個STS(sY254、sY255、sY84、sY86、sY127、sY134)的最低要求。

發明內容

本發明的目的在于提供一種男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，該試劑盒能穩定、高效地對男性Y染色體微缺失基因進行檢測。

本發明的另一個目的在于提供一種男性Y染色體微缺失基因檢測方法，該方法建立在多重PCR和凝膠電泳基礎上，提高了多重PCR的穩定性和均一性。

為達到上述目的，本發明采用如下技術方案：

一種男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括：

特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY82序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：25和SEQ?ID?NO：26所示；

特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY84序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9和SEQ?ID?NO：10所示；