[發明專利]男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒及檢測方法

無效

• 申請號: 200710074317.X
• 申請日: 2007-05-10
• 公開（公告）號: CN101092648A
• 公開（公告）日: 2007-12-26
• 發明（設計）人: 田潔;任維;向筑;廖生赟;鄒耀東
• 申請（專利權）人: 亞能生物技術（深圳）有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市博銳專利事務所
• 代理人: 張明

1.男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒包括：

特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY82序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：25和SEQ?ID?NO：26所示；

特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY84序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9和SEQ?ID?NO：10所示；

特異性擴增Y染色體AZFa亞區sY86序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：15和SEQ?ID?NO：16所示；

特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY124序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：21和SEQ?ID?NO：22所示；

特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY127序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：17和SEQ?ID?NO：18所示；

特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY128序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：2?7和SEQ?ID?NO：28所示；

特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY133序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：29和SEQ?ID?NO：30所示；

特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY134序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：23和SEQ?ID?NO：24所示；

特異性擴增Y染色體AZFb亞區sY143序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4所示；

特異性擴增Y染色體AZFc亞區sY239序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：11和SEQ?ID?NO：12所示；

特異性擴增Y染色體AZFc亞區sY242序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：5和SEQ?ID?NO：6所示；

特異性擴增Y染色體AZFc亞區sY254序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1和SEQ?ID?NO：2所示；

特異性擴增Y染色體AZFc亞區sY255序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：7和SEQ?ID?NO：8所示；

特異性擴增Y染色體AZFd亞區sY145序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：19和SEQ?ID?NO：20所示；????

特異性擴增Y染色體AZFd亞區sY152序列的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：13和SEQ?ID?NO：14所示；

和特異性擴增男性特有Sry基因的引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：31和SEQ?ID?NO：32所示；

上述所有序列可由其堿基互補序列替換。

2.根據權利要求1所述的男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括PCR擴增所需試劑：MgCl₂、甜菜堿、熱啟動酶、UNG酶、dATP、dCTP、dGTP、dUTP和PCR反應緩沖液。

3.根據權利要求2所述的男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，其特征在于所述MgCl₂反應終濃度為1.5mM。

4.根據權利要求2所述的男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，其特征在于所述甜菜堿反應終濃度為1.3M。

5.根據權利要求2所述的男性Y染色體微缺失基因檢測試劑盒，其特征在于所述dATP反應終濃度為200μM、dCTP反應終濃度為200μM、dGTP反應終濃度為200μM、dUTP反應終濃度為400μM。

6.男性Y染色體微缺失基因檢測方法，包括以下步驟：

1)從抗凝全血中提取人基因組DNA；

2)以步驟1)所得DNA為模板，利用權利要求1所述特異性擴增Y染色體AZF的引物進行PCR擴增；

3)PCR產物瓊脂糖凝膠電泳分析。

7.根據權利要求5所述的男性Y染色體微缺失基因檢測方法，其特征在于所述PCR擴增分四管進行，第一管包括10條引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：1-8和SEQ?ID?NO：31-32所示；第二管包括8條引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：9-14和SEQ?ID?NO：31-32所示；第三管包括10條引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：15-22和SEQ?ID?NO：31-32所示；第四管包括10條引物，其堿基序列如SEQ?ID?NO：23-30和SEQ?ID?NO：31-32所示。

8.根據權利要求5所述的男性Y染色體微缺失基因檢測方法，其特征在于所述PCR反應體系中含有甜菜堿，其反應終濃度為1.3M。