[發明專利]溶血劑、白細胞分類試劑體系及分類方法

有效

• 申請號: 200710073144.X
• 申請日: 2007-01-29
• 公開（公告）號: CN101236192A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 匡玉吉;徐兵
• 申請（專利權）人: 深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N33/50;G01N33/72
• 代理公司: 深圳創友專利商標代理有限公司
• 代理人: 羅瑤

技術領域

本發明涉及一種血液細胞分析用試劑及分析方法，特別是涉及一種可用于血紅蛋白濃度測定的溶血劑、一種用于白細胞分類的試劑體系以及使用該試劑對白細胞進行分類的方法。

背景技術

在臨床檢驗領域中，對患者血液進行血紅蛋白濃度測定和白細胞分類在多種血液疾病的診斷和治療中具有重要意義。

在全自動血液分析裝置上進行血紅蛋白濃度測定和白細胞分類都涉及到溶血劑的使用。一方面溶血劑可以溶解紅細胞，使細胞內的血紅蛋白釋放，用于血紅蛋白的測定。另一方面，溶血劑破壞紅細胞后可以消除紅細胞以及紅細胞碎片對白細胞分析的干擾，方便后續的白細胞計數和分類。

血紅蛋白的測定方法很多，其中氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)法為國際血液標準化委員會推薦使用的參考性方法。在這一方法中使用了非離子表面活性劑Triton?X-100作為溶血劑。紅細胞被破壞后，釋放出的血紅蛋白被高鐵氰化鉀氧化成高鐵血紅蛋白，再與氰(CN^-)離子結合形成穩定的氰化高鐵血紅蛋白(HiCN)。HiCN在波長540nm處有吸收峰，可用分光光度計進行直接測定或用HiCN參考液進行比色法測定。但是HiCN法中使用了劇毒品氰化鉀，試劑常溫下不穩定，易受多種因素的干擾，并且由于反應時間過長(約5分鐘)，因此并不適用于全自動血液分析裝置。

由于測定血紅蛋白的HiCN法中的氰化物有劇毒，因此一些無氰血紅蛋白測定的方法陸續被公布出來。例如，Oshiro等(Clin?Biochem.1982Apr；15(2)：83-8.)介紹了一種無氰血紅蛋白測定的方法。在這一方法中使用了陰離子表面活性劑月桂基硫酸鈉(SLS，又稱十二烷基硫酸鈉，SDS)和非離子表面活性劑Triton?X-100。SLS不僅可以與Triton?X-100一同起到溶血劑作用，還可以與血紅蛋白結合形成SLS-血紅蛋白復合物。此復合物在535nm左右有吸收峰，但由于其摩爾消光系數還未確定，不能直接用吸光度值直接計算血紅蛋白濃度，需用HiCN法定值的血液標本繪制標準曲線后間接計算血紅蛋白濃度。另外，Zander等(Clin?Chim?Acta.1984?Jan16；136(1)：83-93)介紹了一種無氰血紅蛋白測定的方法。這一方法中使用了非離子表面活性劑Triton?X-100作為溶血劑。反應的最終產物為堿性高鐵血紅蛋白D-575(alkaline?haematin?D-575，AHD-575)，其在575nm有吸收峰，可用分光光度計進行直接測定。此外，Benazra等(美國專利4,853,338)也公開了一種無氰血紅蛋白測定法。在這一方法中使用了季銨鹽類陽離子表面活性劑作為溶血劑。

不過，由于表面活性劑的濃度過高或由于試劑體系的pH值過于極端，以上三種方法在溶解紅細胞的同時也會對白細胞產生強烈的破壞作用。因此，雖然這些溶血劑可用于血紅蛋白濃度的測定，但并不適用于對白細胞進行分類分析。

近年來，一些能同時測定血紅蛋白濃度和對白細胞進行分類的方法被陸續公布出來。如美國專利6632676、2002/0098589、2004/0241769、RE38131、5958781、5882934、5866428、5834315、5612223、5242832、5250437等應用一種或多種季銨鹽類、吡啶鹽類陽離子表面活性劑、非離子表面活性劑和兩性離子表面活性劑作為溶血劑，對血紅蛋白濃度和白細胞分類進行分析。此類試劑僅能裂解紅細胞，對白細胞有損傷但不嚴重。同時，由于表面活性劑對各類白細胞的損傷程度不同，因此會造成細胞的大小出現差異，從而通過細胞大小這個參數對白細胞進行兩類或三類細胞分群。不過，這些方法中表面活性劑的使用濃度仍然偏高(幾克到幾十克)，并且有些方法中試劑體系的pH過于極端，可能會對自動血液分析裝置的管路和器件造成損害。

然而，隨著醫學的不斷進步，對白細胞進行兩類或三類細胞分群已有些不能適應臨床的需要，一些對白細胞進行四類或五類分群的方法已經被公布出來。

例如，Sakata等(美國專利5618733)公開了用于白細胞四分類的測定方法。方法中同樣采用了季胺鹽類陽離子表面活性劑作為溶血劑。溶血劑對各類白細胞的損傷不同，會使各類細胞皺縮的情況產生差異，從而使各類白細胞低角度散射光強度產生差異。同時，試劑中還使用芳香族有機酸或酸性色素對各類白細胞進行染色，從而使各類白細胞的高角度散射光強度也產生差異。通過高、低角度散射光的組合，可以對白細胞進行四類細胞分群。不過化學染料的使用不僅會增加試劑的成本，而且增加了儀器和試劑的復雜性。