[發明專利]具有抗氧化活性的血清蛋白及其制備方法

無效

• 申請號: 200710072775.X
• 申請日: 2007-09-07
• 公開（公告）號: CN101153312A
• 公開（公告）日: 2008-04-02
• 發明（設計）人: 孔保華;劉騫
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12P21/02
• 分類號: C12P21/02
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司
• 代理人: 劉婭

(一)技術領域

本發明涉及一種天然食品抗氧化劑。具體地說是一種具有抗氧化活性的血清蛋白。本發明還涉及一種具有抗氧化活性的血清蛋白的制備方法。

(二)背景技術

動物血液是屠宰加工的主要副產物，蛋白質含量約為18％左右，但是在我國血液的利用率卻很低，因此造成蛋白資源的巨大的浪費并且隨之帶來較大的環境壓力。目前，利用不同蛋白資源開發功能多肽已經成為研究的熱點。

豬血清蛋白具有良好的抗氧化作用，它保護生命的正常運行。血清蛋白是血液循環中主要的抗氧化劑，根據文獻報道，血清蛋白可以保護培養的細胞使其免受氧自由基的傷害；血清蛋白能抑制鐵離子催化的脂質氧化；體內試驗研究則表明，血清蛋白具有保護人的低密度脂蛋白(LDL)使其免受氧化和防止紅細胞的溶血作用。

(三)發明內容

本發明的目的在于提供一種在體外和體內均有抗氧化作用，可以作為抗氧化劑添加入食品中的具有抗氧化活性的血清蛋白。本發明的目的還在于提供一種具有抗氧化活性的血清蛋白的制備方法。

本發明的目的是這樣實現的：

它是濃度為4％的豬血清蛋白底物，在90℃溫度下進行10分鐘的熱處理之后，加入堿性蛋白酶進行水解，酶與底物濃度之比[E/S]為2∶100-120，在45-55℃溫度、pH值7.5-8.5的條件下，水解3-5小時得到的分子量在550.23-1022.7之間混合肽。本發明的產品是采用這樣的方法來制備的：將濃度為4％的豬血清蛋白底物，在90℃溫度下進行10分鐘的熱處理之后，加入堿性蛋白酶進行水解，酶與底物濃度之比[E/S]為2∶100-120，在45-55℃溫度、pH值7.5-8.5的條件下，水解3-5小時得到產品。

本發明的水解度(DH)可以達到18.85％；水解后的豬血清蛋白肽表現出良好的抗氧化活性。

本發明的水解產物的特性可以通過如下方法來驗證：

體外抗氧化活性在卵磷脂脂質氧化體系(簡稱Lipsome氧化體系)中進行，Lipsome氧化體系配制方法為：稱取0.89472g氯化鉀，0.0776g組氨酸，加水稀釋到100mL，調其pH值到6.8，再取純度20％的大豆卵磷脂1g溶于氯化鉀-組氨酸緩沖溶液中，制成2mg/mL的脂質體。進行抗氧化試驗時取稀釋10倍的脂質體5mL，加入樣品1mL，以及加入0.1mL?50mm?Fecl₃溶液和0.1mL?10mm抗壞血酸鹽溶液，37℃水浴1h，血清蛋白水解物與未水解的血清蛋白相比，其TBARs(流代巴比妥酸值)下降44.97％，過氧化值(POV值)下降47.06％；還原能力(FRAP值)提高3.68倍，對DPPH自由基(1，1-二苯代苦味酰基自由基)的清除率達到60％；將分子量小于3kDa的血清蛋白肽進行分離，經過SephadexG-25凝膠層析、SP-SephadexC-25陽離子交換和RP-HPLC純化后，得到了一組活性較高的抗氧化肽，將其分離后得到活性較高的肽的單峰，質譜(MS)測定結果顯示為分子量為550.23，568.19，656.18和1022.7的肽段組成的一個混合肽；動物試驗的結果表明，對大鼠灌胃處理一個月以后，血清蛋白肽能夠顯著降低大鼠血清總膽固醇水平(TC)和甘油三酯水平(TG)以及丙二醛(MDA)含量，而且血清蛋白肽可以顯著提高血清中的過氧化氫酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)以及谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)的活力。

本發明的制備方法操作簡單，與合成抗氧化劑相比安全可靠，適合工業化生產，能夠大幅度提高血清蛋白資源的利用率，提高血液綜合利用的水平。所制備的血清蛋白抗氧化肽在體外和體內均有抗氧化作用，可以作為抗氧化劑添加入食品中。

(四)具體實施方式

下面舉例對本發明做更詳細地描述：

豬血清蛋白底物濃度為4％，在90℃，10min的熱處理之后，加入堿性蛋白酶進行水解，酶與底物濃度之比[E/S]為2∶100，水解溫度為5?0℃，控制pH值8.0，水解時間4h。