[發(fā)明專利]一種高增殖力、高細胞毒活性CIK細胞的制備方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710072095.8
• 申請日: 2007-04-25
• 公開（公告）號: CN101063108A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發(fā)明（設計）人: 王志華;秦莉
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫(yī)科大學
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06;C12N5/08
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所
• 代理人: 單軍

1、一種高增殖力、高細胞毒活性CIK細胞的制備方法，其特征在于高增殖力、高細胞毒活性CIK細胞按以下步驟制備：將單個核細胞用含10％胎牛血清的RPMI?1640培養(yǎng)基懸浮2h，之后加入基因重組人細胞因子IFN-γ，使懸浮液中IFN-γ的濃度為1000U/mL，繼續(xù)培養(yǎng)24h后加入CD3單抗體蛋白及基因重組人細胞因子IL-2、IL-12和IL-1，使培養(yǎng)液中CD3單抗體蛋白的濃度為100ng/mL、細胞因子IL-2的濃度為600U/mL、細胞因子IL-12的濃度為5ng/mL、細胞因子IL-1的濃度為100U/mL，然后再在37℃、CO₂濃度為5％、濕度為100％的環(huán)境中繼續(xù)培養(yǎng)7～24天，即得到高增殖力、高細胞毒活性CIK細胞；其中加入CD3單抗體蛋白和基因重組人細胞因子IL-2、IL-12和IL-1后每隔3天半量換液，并補加IL-2和IL-12以保持培養(yǎng)液中的濃度不變；加入CD3單抗體蛋白和基因重組人細胞因子IL-2、IL-12和IL-1后第6天再補加CD3單抗體蛋白，使培養(yǎng)液中CD3單抗體蛋白的濃度達到100ng/mL。

2、根據權利要求1所述的一種高增殖力、高細胞毒活性CIK細胞的制備方法，其特征在于單個核細胞是采用Ficoll密度梯度分離法從健康成人外周血中分離得到外周血單個核細胞。