[發明專利]CIK細胞的凍存及復蘇

有效

• 申請號: 200710072094.3
• 申請日: 2007-04-25
• 公開（公告）號: CN101063107A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 王志華;袁玉濤
• 申請（專利權）人: 哈爾濱醫科大學
• 主分類號: C12N5/06
• 分類號: C12N5/06;C12N5/08
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所
• 代理人: 榮玲

1.CIK細胞的凍存及復蘇，其特征在于CIK細胞的凍存及復蘇通過以下步驟實現：一、CIK細胞的凍存：a、取CIK細胞放入離心管中，然后以1000轉/分鐘的速度離心5分鐘，取出上清液放于玻璃瓶中并于零下20度凍存，視上清液完全凍結后，將裝有上清液的玻璃瓶放于零下80度的低溫冰箱中凍存備用，b、向離心管內的細胞中加入細胞凍存液，細胞凍存液是由AIMV和DMSO按照9∶1的體積比配制，然后將離心管內物質放于凍存管中，c、按照溫度下降速度為10攝氏度/小時的速率將凍存管在4℃的溫度下放置1小時后，再于零下20℃放置2小時，然后放入零下80℃冰箱過夜，最后放于液氮中凍存，即達到凍存CIK細胞的目的；二、CIK細胞的復蘇：d、取出步驟一a中凍存的上清液于4度冰箱中解凍，然后將上清液在2000轉/分鐘的條件下離心5分鐘，取上清液備用，得到經過離心處理的上清液，e、將凍存的CIK細胞放入37～40℃的溫水中速融，然后將CIK細胞加入到裝有生理鹽水的離心管中并以1000轉/分鐘的速度離心5分鐘，然后去上清液，f、將CIK細胞放入到步驟二d中經過離心處理的上清液中，然后將細胞濃度稀釋到1.0×10⁶個/ml后均分于六孔板中培養，根據每孔中細胞的量按600U/ml的濃度加IL-2、按100ng/ml的濃度加CD3mAb，于孵箱中培養，即達到CIK細胞復蘇的目的。