[發明專利]一種增強抗菌肽在植物體內表達的豐度和穩定性的方法

無效

• 申請號: 200710071592.6
• 申請日: 2007-09-30
• 公開（公告）號: CN101397559A
• 公開（公告）日: 2009-04-01
• 發明（設計）人: 劉仁虎;陳錦清;汪小福;陳笑蕓;王伏林;劉智宏;郎春秀
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: C12N15/09
• 分類號: C12N15/09;C12N15/62;C12N15/82
• 代理公司: 杭州杭誠專利事務所有限公司
• 代理人: 尉偉敏

1.一種增強抗菌肽在植物體內表達的豐度和穩定性的方法，包含以下步驟：A)以特征序列為MASERQALMLILLTTFFFTIKPSQA的大豆幾丁質酶信號肽為引導肽，引導目標蛋白定向積累于細胞壁和細胞間隙；B)以特征序列為SNAADEVATPEDVEPG的多肽為連接肽，連接多個抗菌肽串聯融合表達，表達后于S↓NAADEVATPE↓DVEPG位點剪切為多個抗菌肽單元；C)根據目標植物密碼子使用頻率對編碼序列進行優化；D)將引導肽、抗菌肽、連接肽組合成引導肽+抗菌肽+(連接肽+抗菌肽)*N的結構形式將抗菌肽串聯融合表達，提高抗菌肽表達效率和穩定性，N為任意拷貝數。

2.根據權利要求1所述的增強抗菌肽在植物體內表達的豐度和穩定性的方法，其特征在于所述的多拷貝抗菌肽融合表達包含以下步驟：A)在引導肽+抗菌肽的融合基因末端設計Bgl?II+終止密碼+Xba?I或其它切點，克隆構建Destination?Vector，B)在連接肽+抗菌肽的融合基因頭部加BamH?I切點，尾部加Bgl?II+終止密碼+Xba?I或其它切點(同A步驟的末端設計)，克隆構建EntryVector；C)將Entry?Vector的目標序列用BamH?I和Xba?I切下，連接于Destination?Vector用Bgl?II和Xba?I酶切產生的載體臂，以所得新的載體為Destination?Vector將Entry?Vector目標片段反復連接進入Destination?Vector，直至獲得所需抗菌肽基因拷貝數。