[發明專利]一種具有與腫瘤細胞特異性結合功能的微膠囊的制備方法

無效

• 申請號: 200710070115.8
• 申請日: 2007-07-20
• 公開（公告）號: CN101099727A
• 公開（公告）日: 2008-01-09
• 發明（設計）人: 高長有;趙慶賀;毛崢偉;沈家驄
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A61K9/50
• 分類號: A61K9/50;A61K47/32;A61P35/00;B01J13/06
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 韓介梅

技術領域

本發明涉及微膠囊的制備方法，尤其是制備具有與腫瘤細胞特異性結合功能的層狀結構微膠囊的方法。

背景技術

具有靶向傳遞功能的載藥體系，在腫瘤的治療中有十分重要的作用，能夠提高藥物的利用度，改變藥代動力學，降低化療藥物對正常組織的損傷和機體對化療藥物的耐藥性。多種結構的材料如脂質體、囊泡、膠束、微粒和微球、水凝膠和中空納米囊和微膠囊等都被用作藥物的傳遞體系。傳遞體系的靶向性可以通過理化的、生物特異性識別等方法來實現，包括直接導入、脂質體傳遞、病毒介導等。陽離子脂質體傳遞技術雖可大大提高導入效率，但無靶向性，生物半衰期短；病毒介導效率較高，但病毒制備困難，且存在誘導宿主免疫反應的問題，有潛在的致瘤性。而受體介導的藥物傳遞體系利用某些組織特有的受體或腫瘤細胞過量表達的受體，通過受體介導將所攜帶的藥物靶向轉運到特定的組織和細胞，具有高特異性、高親和力的特點，大大提高了藥物轉運效率，且適用面廣。與正常細胞相比，腫瘤細胞表面會過量表達葉酸的受體。因此，將葉酸固定到傳遞體系的表面，可望獲得具有與腫瘤細胞表面特異性結合程度高的藥物傳遞體系。

微膠囊是通過成膜物質將囊內空間與囊外空間隔離開以形成特定幾何結構的物質，其內部可以是填充的，也可以是中空的。傳統微膠囊尺寸大小通常在微米至毫米級，壁厚在亞微米至幾百微米。根據囊壁形成的原理，微膠囊的傳統制備方法大體可分為三類：利用反應生成囊壁的化學方法、利用相分離形成囊壁的物理化學方法和利用機械或其它物理作用形成囊壁的物理方法。囊壁通常由天然或合成的高分子材料組成，也可是無機化合物。近年來，又發展了許多新的微膠囊的制備方法，如模板組裝、模板聚合、表面接枝聚合、分散聚合等。其中，基于模板層一層自組裝方法制備的微膠囊具有結構和性能可控、易賦予各種獨特功能等特點。微膠囊的尺寸由模板預先控制，而壁厚可控制在納米尺度內。微膠囊的滲透性以及包埋物質的釋放性能可以通過環境條件如溫度、離子種類和離子強度、pH值、溶液性質、光、電、聲等進行控制。因此在藥物控制釋放、酶的包埋與催化反應、組織工程等領域顯示了十分重要的應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種具有與腫瘤細胞特異性結合功能的微膠囊的制備方法，即具有與腫瘤細胞結合程度高的靶向微膠囊的制備方法。

具有與腫瘤細胞特異性結合功能的微膠囊的制備方法，包括以下步驟：

1)在濃度為0.33M/L的含鈣無機鹽水溶液中，攪拌下加入等體積的濃度為0.33M/L的含碳酸根無機鹽水溶液，攪拌下反應15分鐘，離心過濾，得CaCO₃膠體微粒；

或者在濃度為0.005M/L的含鈣無機鹽水溶液中加入聚苯乙烯磺酸鈉，攪拌下加入等體積的濃度為0.005M/L的含碳酸根無機鹽水溶液，聚苯乙烯磺酸鈉的終濃度為0.5mg/mL，攪拌下反應5分鐘，離心過濾，得內部含聚苯乙烯磺酸鈉的CaCO₃膠體微粒；

2)將1mL濃度為1mg/mL的聚烯丙基胺鹽酸鹽的0.5M的NaCl溶液與步驟1)的CaCO₃膠體微?；旌?，10分鐘后離心棄上清液，水洗后，得到第一層為聚烯丙基胺鹽酸鹽的CaCO₃膠體微粒；再將該CaCO₃膠體微粒分散在1mL濃度為1mg/mL聚苯乙烯磺酸鈉的0.5M的NaCl溶液中，10分鐘后離心棄上清液，水洗后，得到第二層為聚苯乙烯磺酸鈉的CaCO₃膠體微粒；重復以上過程，并使最外層為聚烯丙基胺鹽酸鹽，得到聚電解質多層膜包裹的核—殼結構微粒；

3)向步驟2)制得的微粒中加入1mL?0.5％戊二醛，室溫下反應12小時，離心，去上清，水洗后；向其中加入1mL?2％的雙端氨基聚乙二醇，室溫下反應24小時，得到聚乙二醇修飾的表面含有氨基的核—殼粒子，離心，去上清，水洗后；加入2mg/mL的NaBH₄溶液，4℃下反應12小時，然后離心，棄去上清，水洗后；加入2.5mM/mL葉酸、20mg/mL?1-乙基-3-(3-二甲氨基-丙基)碳二亞胺和10mg/mL?N-羥基琥珀酰亞胺溶液，室溫下反應24小時；去上清，水洗后，得到葉酸修飾的CaCO₃膠體粒子；

4)采用鹽酸或乙二胺四乙酸絡合去除CaCO₃膠體微粒，得到葉酸修飾的中空微膠囊或內含聚苯乙烯磺酸鈉的微膠囊。

本發明中，所說的含鈣無機鹽可以是硝酸鈣或氯化鈣；含碳酸根無機鹽可以是碳酸鈉或碳酸氫銨。所說的CaCO₃膠體微粒的去除方法采用鹽酸分解或乙二胺四乙酸絡合。