[發明專利]螺旋藻工廠化培植優良品系的篩選方法

無效

• 申請號: 200710069961.8
• 申請日: 2007-07-09
• 公開（公告）號: CN101240242A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 汪志平;黃暉;楊靈勇;曹學成
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N1/12
• 分類號: C12N1/12
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司
• 代理人: 陳禎祥

1.?一種篩選用于螺旋藻工廠化培植的優良品系的方法，其特征是將7株螺旋藻品系Sp-1、Sp-2、Sp-3、Sp-4、Sp-5、Sp-6、Sp-7分成兩類，一類是Sp-1、Sp-2和Sp-6，另一類是Sp-3、Sp-4、Sp-5和Sp-7；與候選螺旋藻品系的第1～80位藻藍蛋白連接多肽I氨基酸序列，按SeqNO.1的第7、20、30、56、72位點進行多重比對，比對結果，如與前一類相同，其性狀為劣質；如與后一類相同則其性狀為優質。

2.?按權利要求1所述篩選優質螺旋藻品系的方法，具體采用下列操作步驟：

(1)選用材料為7株螺旋藻品系，即Sp-1、Sp-2、Sp-3、Sp-4、Sp-5、Sp-6和Sp-7；

(2)試劑和儀器

Taq?DNA聚合酶和瓊脂糖為上海生工生物工程公司產品；克隆載體pMD18-T、dNTP、DNA限制性內切酶、T4?DNA連接酶、RNase?A均為日本TaKaRa公司產品；DNA凝膠回收試劑盒購于Invitrogen公司；PCR引物由上海英駿公司合成，其它試劑均為分析純，序列擴增用美國Hybaid公司的Thermal?Cycler?PCR儀，測序用美國ABI公司的3730型測序儀；

(3)PCR引物設計與擴增

引物根據GenBank上相應的序列AF164139，利用Primer?5.0引物設計軟件得到上游引物PF：5’-TTTAGCAGAAGCAAGTCGCC-3’，下游引物PR：5’-CGTATTATCGGTAGTCATCGG-3’，25μL?PCR反應體系中含引物PF和PR各0.5μmol/L，4種dNTP各1μmol/L，2.5U的Taq?DNA聚合酶，10倍的PCR緩沖液2.5μL，100ng基因組DNA，PCR反應程序為94℃?5min；94℃?30s，65℃?1.5min，72℃?3min，30個循環；最后72℃延伸8min；

(4)PCR產物的克隆及測序

將經DNA凝膠回收試劑盒回收純化的PCR產物連接到pMD18-T載體上，轉化感受態E.coli?TG1，藍白斑法篩選陽性克隆，提取質粒并作酶切鑒定，將含有目的片段的重組質粒進行測序；

(5)序列翻譯與多重聯配

采用DNAStar?v1.63軟件將藻藍蛋白連接多肽I基因序列翻譯成氨基酸序列，并利用ClustalX?1.81軟件對所得序列進行多重聯配。