[發明專利]OT型雜種系百合脫毒組培快繁方法

無效

• 申請號: 200710068034.4
• 申請日: 2007-04-13
• 公開（公告）號: CN101061790A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 郭方其;黎俠;丁曉瑜;林森洪;柴金甫;陳世平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司
• 代理人: 沈伾伾

技術領域

本發明涉及植物組培快繁技術領域，尤其涉及一種OT型雜交百合的脫毒組培快繁方法。

背景技術

OT型雜交百合(Oriental×Trumpet?Hybrid)系東方百合與喇叭百合/奧列連諾斯雜種系的雜交系列，為百合科多年生觀賞植物，主要用于切花栽培。其植株莖桿強度、抗病性、耐熱性、耐鹽堿性等性狀明顯優于東方百合，故有很好的市場開發前景。近年我國百合切花生產量年增長20％以上，但百合種球卻一直依賴于從國外進口。然而，病毒病侵染造成百合種性的嚴重退化，給世界各地百合種球生產者帶來了巨大的經濟損失，因此開發百合組培脫毒快繁技術對實現種球國產化具有重要的意義。百合傳統采用簡便的鱗片扦插繁育方法，但其一方面繁殖系數較低，新品種通過鱗片扦插繁殖至大面積推往往需要5～8年時間，十分不利于新品種的快速推廣；另一方面由于長期無性繁殖導致病毒的感染和積累，使種球產量和質量下降，從而限制了種球生產的發展。

組培與脫毒苗生產的關鍵是脫毒技術，而脫毒技術有多種，例如熱處理脫毒、莖尖培養脫毒和愈傷組織脫毒及相互間的組合脫毒。其中普遍采用較好的是莖尖培養脫毒法，其常規的步驟是：通過植物頂端分生組織切取0.2～0.3mm莖尖，誘導愈傷組織，然后從愈傷組織分化產生鱗莖芽，長成小植株得到脫毒苗或培養試管鱗莖。百合科百合屬園藝種應用組培技術快速繁殖試管鱗莖已有成功的例子，并有相關的專利報導，例如，CN1762205A披露了采用莖尖作為外植體，經莖尖培養后得到東方百合脫毒鱗莖的方法；CN1695427A發明名稱為“一種培育東方百合試管鱗莖的方法”公開了通過選擇無病毒的鱗莖，采用鱗片接種進行無菌條件下培育鱗莖。

但是這兩種脫毒組織培養法存在的問題是：前者切取很小的莖尖分生組織，在添加6-BA?1.0～2.0mg/L和NAA0.2～0.5mg/L的MS培養基上培養20～25d，莖尖會同時形成愈傷組織和不定芽，但從愈傷組織分化的不定芽(鱗莖芽)易發生遺傳變異；后者選擇生長健壯植株的鱗莖，對經檢測不帶病毒的鱗莖，直接進行鱗片誘導培養，該方法一方面由于受檢測病毒種類的限制，存在有未經莖尖脫毒培養的鱗莖仍帶有其它種類病毒的可能性；另一方面隨著培養代數的增加，容易產生植物體內內生菌大量繁殖而引起的污染，嚴重影響組培苗正常生產。

OT型雜交百合是近年荷蘭新育成的種間雜交品種，其品種特性與東方百合有較大差異，按常規方法進行OT型雜交百合莖尖脫毒培養時易發生玻璃化，而且增殖系數較低，其鱗莖膨大培養對培養基配方和培養條件有嚴格的要求，故尚未見有關該品種百合組織培養成功的報道，因此，開發此項技術對加快OT型雜交百合新品種的推廣有重要價值。

發明內容

本發明目的是克服以上常規莖尖培養脫毒法，所存在的通過愈傷組織分化，產生的鱗莖芽易發生遺傳變異、易發生玻璃化、增殖系數較低及脫毒不徹底等缺陷，提出一種適于OT型雜交百合脫毒組織培養的優化培養基配方和應用該配方進行快速、種性好、低成本繁殖試管鱗莖的方法。

本發明目的通過以下技術方案來實現：

一種OT型雜交百合脫毒組培快繁方法，按如下步驟進行：

(1)培養基的配制、備用：包括基本培養基和組培各階段培養基的組分與各組分在每升培養基內所含重量為：

a)基本培養基：誘導、增殖培養基選用白糖為30～50g/L，瓊脂粉為4～5g/L的MS基本培養基，pH為5.6～5.8；試管鱗莖膨大培養基選用白糖為70～90g/L，瓊脂粉為4.0g/L的MS基本培養基，另加甘露醇1.0～5.0g/L，AC?1.0～5.0mg/L，pH為6.0；

b)誘導培養基I(種源鱗莖莖尖誘導培養基)：MS+6-BA?1.0～2.0mg/L+IBA?0.1～0.5mg/L+AC?1.0～3.0mg/L；

c)誘導培養基II(組培苗莖尖誘導培養基)：MS+6-BA?0.5～1.0mg/L+IBA?0.1～0.5mg/L；

d)增殖培養基：MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA?0.1～0.5mg/L；

e)鱗莖膨大培養基：MS+NAA?0.1～0.5mg/L；

(2)外植體熱處理和滅菌：取經過5℃低溫處理3～4個月，打破休眠后的OT型雜交百合種源鱗莖，用透氣塑料薄膜包裹后置在潮濕泥炭中，于50℃培養箱內熱處理70～90分鐘，剝離外層鱗片，取3～5cm長的鱗莖芽，用水清洗后，進行滅菌處理；