[發明專利]OT型雜種系百合脫毒組培快繁方法

無效

• 申請號: 200710068034.4
• 申請日: 2007-04-13
• 公開（公告）號: CN101061790A
• 公開（公告）日: 2007-10-31
• 發明（設計）人: 郭方其;黎俠;丁曉瑜;林森洪;柴金甫;陳世平
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 杭州豐禾專利事務所有限公司
• 代理人: 沈伾伾

1、OT型雜種系百合脫毒組培快繁方法，其特征在于按如下步驟進行：

(1)培養基的配制、備用：包括基本培養基和組培各階段培養基的組分與各組分在每升培養基內所含重量為：

a)基本培養基：誘導培養基和增殖培養基采用白糖為30～50g/L，瓊脂粉為4～5g/L的MS基本培養基，pH為5.6～5.8；鱗莖膨大培養基選用白糖為70～90g/L，瓊脂粉為4.0g/L的MS基本培養基，另加甘露醇1.0～5.0g/L，AC1.0～5.0mg/L，pH為6.0；

b)誘導培養基I：MS+6-BA?1.0～2.0mg/L+IBA?0.1～0.5mg/L+AC1.0～3.0mg/L；

c)誘導培養基II：MS+6-BA?0.5～1.0mg/L+IBA?0.1～0.5mg/L；

d)增殖培養基：MS+6-BA0.2～1.0mg/L+IBA?0.1～0.5mg/L；

e)鱗莖膨大培養基：MS+NAA?0.1～0.5mg/L；

(2)外植體熱處理和滅菌：取經過5℃低溫處理3～4個月，打破休眠后的OT型雜交百合種源鱗莖，用透氣塑料薄膜包裹后置在潮濕泥炭中，于50℃培養箱內熱處理70～90分鐘，剝離外層鱗片，取3～5cm長的鱗莖芽，用水清洗后，進行滅菌處理；

(3)誘導培養：取步驟(2)0.2～0.3mm莖尖作為外植體，植于誘導培養基I，在溫度20±1℃，光照12h/d，光照強度1000～3000Lx的環境條件下，經2個月培養，直接誘導成鱗莖芽和/或無根組培苗；切去葉片，將鱗莖縱向切成2塊，轉接至誘導培養基I，在溫度20±1℃，光照12h/d，光照強度1000～3000Lx的環境條件下，誘導出多個鱗莖芽，經2～3個月培養全部形成無根組培苗；將無根組培苗放入光照培養箱內按30、35、38℃的順序，每3d變換一檔，循環熱處理50～60d后，取0.2～0.3mm莖尖接種在誘導培養基II上，進行第二次莖尖脫毒培養，在溫度20±1℃，光照12h/d，光照強度1000～3000Lx的環境條件下，經2～3個月培養，直接誘導出鱗莖芽和/或無根組培苗，然后將它們直接放入3～5℃低溫處理45～60d，以提高組培苗生長活性；

(4)增殖培養：將步驟(3)低溫處理后的鱗莖芽或無根組培苗，切去葉片和部分基部組織后的鱗莖，縱切成4～6塊，接種在增殖培養基上，在溫度20±1℃，光照12h/d，光照強度1000～3000Lx的環境條件下培養2個月，形成健壯的鱗莖芽和/或無根組培苗；

(5)鱗莖膨大培養：將步驟(4)鱗莖芽和/或無根組培苗切去葉片和部分基部組織，接種在鱗莖膨大培養基中，在20±2℃和黑暗條件下培養60～70d，長成直徑0.8～1.2cm，根系5～10條/粒，重0.5～1.0g/粒的試管鱗莖；

(6)冷藏：取出步驟(5)試管鱗莖用清水洗去瓊脂，包裹于消毒泥炭中，經10～12℃預處理10～20d，再經3～5℃冷藏處理50～60d打破休眠，打破休眠的鱗莖在2～3℃下延長貯藏2～3個月；

(7)移栽：將步驟(6)鱗莖，選擇具夏季冷涼氣候的800～1000米海拔地區，在避雨和防蟲隔離條件下，4月下旬至5月中旬移栽在消毒過的基質上，定植30～35d后出苗；

(8)病毒檢測：采用RT-PCR檢測法，對步驟7)脫毒組培苗進行LSV、LMoV病毒檢測，檢測結果未發現病毒的侵染。

2、根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的種源鱗莖為OT型雜交百合的周莖為14～16cm的種球。

3、根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的外植體滅菌處理為75％酒精浸泡0.5～1.0min，無菌水沖洗3～5次，再用0.1％升汞溶液滅菌15～20min，無菌水沖洗3～5次，再用10％的次氯酸鈉水溶液滅菌13～15min，無菌水沖洗3～5次。

4、根據權利要求1所述的方法，其特征在于所述的移栽基質為泥炭∶珍珠巖按體積比7∶3配制而成。