[發明專利]一種具有腫瘤靶向性的多肽及其制備方法

有效

• 申請號: 200710066323.0
• 申請日: 2007-10-29
• 公開（公告）號: CN101143895A
• 公開（公告）日: 2008-03-19
• 發明（設計）人: 董堅;陳明清;劉流;劉為青;張克健
• 申請（專利權）人: 昆明醫學院第一附屬醫院
• 主分類號: C07K7/06
• 分類號: C07K7/06;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 金耀生

技術領域

本發明涉及醫學技術領域，具體地說是一種具有腫瘤靶向性的多肽及其制備方法。

背景技術

腫瘤的攻克一直是生物醫學界的焦點問題。近百年來已經發展形成了手術、放療、化療三大腫瘤臨床治療方法。這些治療手段在一定程度上延長了患者的帶瘤生存期，但它們在臨床應用過程中除了切除和破壞腫瘤還損傷到正常組織的結構和功能，尤其是在全身使用化療藥物時，藥物通過血液循環到達人體的各組織并對正常細胞也發揮殺傷作用，引起全身不良反應，嚴重影響治療的最終效果。因此，新型腫瘤治療手段的研發顯得尤為重要。

隨著人類基因組計劃(HGP)的完成及人類癌癥基因組解剖計劃(CGAP)的深入開展，對腫瘤分子水平的認識得到很大的提高，腫瘤的形成主要是由于一些癌基因、抑癌基因的突變或控制細胞生長的基因如P53、RAS等發生了改變，如果這些發生改變的基因能夠被我們糾正，那么腫瘤可以從根本上被抑制和逆轉。腫瘤的基因治療正是在這種理論下誕生的，并且它被認為是日后徹底治愈腫瘤疾病的有效方法。通過基因載體將目的基因或治療性藥物導入腫瘤細胞的特定位置是基因治療發揮作用的前提條件。但癌癥基因治療的主要難題之一就是開發合適的載體進行全身治療。目前臨床試驗中所用的載體一般有兩類：病毒載體和非病毒載體，以腺病毒載體為代表的病毒類載體的表達率高于其他類型的載體，但這種載體存在的潛在安全性問題很難得到控制，包括產生野生型病毒損傷機體以及病毒DNA可能整合到染色體上引起遺傳變異。病毒載體另一個突出的缺點是轉導無靶向性，無法實現腫瘤的個體化靶向性治療。與病毒載體相比，非病毒類載體的優勢更明顯。目前腫瘤基因治療研究中涉及到的非病毒載體主要包括裸DNA、脂質體、脂質復合物、陽離子多聚物、受體介導的載體等。這類載體種類較多，并具有低毒安全的特點，因此非病毒載體被認為是比較有發展前途的，但它們同樣存在著靶向性差和無靶向性的問題。可以看到，以往對于腫瘤基因治療載體的研究工作主要集中在體外環境下如何提高載體的轉導效率和安全性，很少注意其在體內靶向性的殺傷腫瘤的作用。而腫瘤是個體化疾病，腫瘤的產生存在組織特異性和個體差異，腫瘤基因治療最終的目標是進行個體化治療，因此，臨床上理想的腫瘤基因治療載體應當具備能靶向性運送治療性物質進入腫瘤細胞，不影響正常細胞的生長，表達率高，同時安全無毒等特點。迄今為止國內外尚未報道過這種腫瘤靶向特異性基因治療載體。尚未見受體介導的載體用于腫瘤的親和特異性研究，用受體介導的載體進行乳腺癌細胞的親和特異性的檢測在國內外尚未見報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種新型的具有腫瘤靶向性的多肽，它不僅具備高轉導率，無毒性，更重要的是它能攜帶目的基因或者抗腫瘤藥物靶向性進入腫瘤細胞對其進行治療和殺傷，同時對人體其它正常細胞無親和性或毒性作用。本發明還提供了它的制備方法。

本發明的研究是建立在已有理論的和大量可靠的研究結果的基礎上的。

1988著名的科學雜志“Cell”報道的缺陷病毒HIV-TAT蛋白及隨后報道的單純皰疹病毒VP22蛋白，其轉導效率高于目前所有的基因治療載體。進一步的研究表明HIV-TAT、VP22蛋白等蛋白能夠穿過細胞膜進入細胞是因為在這些蛋白結構中包含了由幾個或十幾個氨基酸殘基組成，并且富含精氨酸(Arginine)的肽鏈，稱為蛋白轉導域(protein-transduction?domain，PTD)。PTD是通過某種受體介導的抗原-抗體的反應機制進入細胞內。隨后對PTD的研究證實，它與各種大分子或生物活性治療藥物偶聯后還可以攜帶原先不能進入細胞的物質穿過細胞膜并在細胞中表達，發揮其生物學效應。PTD是一類多肽類物質，它的發現為我們尋找特異性多肽腫瘤基因治療靶向性載體提供了思路。另外，正如我們所知道的，由于癌基因或抑癌基因的突變或失活等原因，不同腫瘤細胞表面會表達特異性的受體物質，雖然對這些受體的了解尚有限，但這種現象的存在為我們尋找到腫瘤細胞靶向性多肽載體奠定了基礎。如果能夠通過一定的技術方法將與這些腫瘤特異性受體結合的多肽物質分離并分析其氨基酸結構與功能的關系，那么我們就很有可能找到并符合要求的針對不種腫瘤細胞的靶向性基因治療載體。