[發明專利]高效誘導培養百合小鱗莖的方法

有效

• 申請號: 200710066164.4
• 申請日: 2007-09-04
• 公開（公告）號: CN101116424A
• 公開（公告）日: 2008-02-06
• 發明（設計）人: 屈云慧;陳衛民;張婷;李進昆;張藝萍
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 徐玲菊

技術領域

本發明涉及一種在試管內高效生產百合籽球的方法，屬于植物種球繁育技術領域。

背景技術

百合是百合科(Liliaceae)百合屬(Lilium)多年生草本鱗莖植物，是世界著名的觀賞花卉，被廣泛應用于花卉裝飾。近十年來隨著我國人民生活水平的提高，大量優良的觀賞栽培品種陸續從國外引入我國，成為我國花卉市場中的高檔切花種類。百合繁殖系數不高是百合種球生產中一個突出的問題。我國大面積栽培的切花百合，種球絕大部分由荷蘭進口。種球的質量和數量已成為我國百合切花生產的重要限制因素。

百合主要以小鱗莖進行分株或鱗片扦插繁殖，通常1株百合每年只能得到3-200個小鱗莖，繁殖速度及數量非常有限。組織培養是快速繁殖種球較為有效的方法。在百合組培種球種苗的培養過程中，已有的報道均采用組培苗增殖或在試管內直接生成小籽球的培養方式，其增殖率在10萬粒/年以下，但仍不能滿足市場需求量。

發明內容

本發明的目的在于提供一種繁殖速度快，數量多的高效誘導培養百合小鱗莖的方法，以滿足市場需求。

本發明通過下列技術方案實現：一種高效誘導培養百合小鱗莖的方法，包括無菌外植體的獲取及鱗片剝取，其特征在于經過下列步驟進行培養：

A、胚狀體誘導培養：在無菌條件下，將滅菌后的鱗片切塊接種到單位為mg/L的下列誘導培養基中，在溫度為23±3℃，光照時間為10-12h/d，光照強度為1500-2000Lx的條件下培養15-20d，獲得胚狀體愈傷組織：

MS基本培養液

6-芐基氨基嘌呤6-BA????2.0-4.0

萘乙酸NAA?????????????0.1-0.5

蔗糖??????????????????30000

瓊脂??????????????????5500

pH????????????????????5.8；

B、胚狀體組織增殖培養：在無菌條件下，將步驟A獲得的胚狀體愈傷組織切片后轉入單位為mg/L的下列增殖培養基中，在溫度為23±3℃，光照時間為10-12h/d，光照強度為1500-2000Lx的條件下培養15-20d，使胚狀體組織分化成大量胚芽：

MS基本培養液

6-芐基氨基嘌呤6-BA?????1.0-2.0

萘乙酸NAA??????????????0.1-0.5

蔗糖???????????????????30000

瓊脂???????????????????5500

pH?????????????????????5.8；

C、籽球分化培養：將步驟B生成的叢生胚芽分割成片狀，轉入單位為mg/L的下列培養基中進行籽球分化培養，其培養條件為：溫度18-22℃，全黑暗遮光，培養時間25-35d，即在切塊及周圍直接生成小籽球：

MS基本培養液

萘乙酸NAA???????????0-0.5

蔗糖????????????????60000

瓊脂????????????????5500

活性炭??????????????300

pH??????????????????5.5-5.8；

D、籽球膨大培養：將步驟C生成的小籽球分切成單個，剝離外部不規則的小鱗片后轉入單位為mg/L的下列培養基中進行生根及膨大培養，培養條件：溫度18-22℃，全黑暗遮光，培養時間15-20d，籽球長出根系：

1/2MS基本培養液

萘乙酸NAA?????????????1.0-2.0

蔗糖??????????????????60000-90000

瓊脂??????????????????5500

活性炭????????????????300

pH????????????????????5.5-5.8；

E、籽球出瓶及包裝：將合格籽球從培養基中取出后放入裝清水的盆中清洗，濾干水分后立即放入塑料篩中，采用農用鏈霉素∶百菌清＝1∶1的比例按混合800倍液浸泡20-30min，濾干消毒液后用打孔的塑料袋包裝，及時放置到冷庫中貯藏。