[發明專利]高效誘導培養百合小鱗莖的方法

有效

• 申請號: 200710066164.4
• 申請日: 2007-09-04
• 公開（公告）號: CN101116424A
• 公開（公告）日: 2008-02-06
• 發明（設計）人: 屈云慧;陳衛民;張婷;李進昆;張藝萍
• 申請（專利權）人: 云南省農業科學院花卉研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 昆明正原專利代理有限責任公司
• 代理人: 徐玲菊

1.一種高效誘導培養百合小鱗莖的方法，包括無菌外植體的獲取及鱗片剝取，其特征在于經過下列步驟進行培養：

A、胚狀體誘導培養：在無菌條件下，將滅菌后的鱗片切塊接種到單位為mg/L的下列誘導培養基中，在溫度為23±3℃，光照時間為10-12h/d，光照強度為1500-2000Lx的條件下培養15-20d，獲得胚狀體愈傷組織：

MS基本培養液

6-芐基氨基嘌呤6-BA????????????????????2.0-4.0

萘乙酸NAA?????????????????????????????0.1-0.5

蔗糖??????????????????????????????????30000

瓊脂??????????????????????????????????5500

pH????????????????????????????????????5.8；

B、胚狀體組織增殖培養：在無菌條件下，將步驟A獲得的胚狀體愈傷組織切片后轉入單位為mg/L的下列增殖培養基中，在溫度為23±3℃，光照時間為10-12h/d，光照強度為1500-2000Lx的條件下培養15-20d，使胚狀體組織分化成大量胚芽：

MS基本培養液

6-芐基氨基嘌呤6-BA????????????????????1.0-2.0

萘乙酸NAA?????????????????????????????0.1-0.5

蔗糖??????????????????????????????????30000

瓊脂??????????????????????????????????5500

pH????????????????????????????????????5.8；

C、籽球分化培養：將步驟B生成的叢生胚芽分割成片狀，轉入單位為mg/L的下列培養基中進行籽球分化培養，其培養條件為：溫度18-22℃，全黑暗遮光，培養時間25-35d，即在切塊及周圍直接生成小籽球：

MS基本培養液

萘乙酸NAA????????????????????????0.1

蔗糖????????????????????????????60000

瓊脂????????????????????????????5500

活性炭??????????????????????????300

pH??????????????????????????????5.5-5.8；

D、籽球膨大培養：將步驟C生成的小籽球分切成單個，剝離外部不規則的小鱗片后轉入單位為mg/L的下列培養基中進行生根及膨大培養，培養條件：溫度18-22℃，全黑暗遮光，培養時間15-20d，籽球長出根系：

1/2MS基本培養液

萘乙酸NAA???????????????????????1.0-2.0

蔗糖????????????????????????????60000-90000

瓊脂????????????????????????????5500

活性炭??????????????????????????300

pH??????????????????????????????5.5-5.8；

E、籽球出瓶及包裝：將合格籽球從培養基中取出后放入裝清水的盆中清洗，濾干水分后立即放入塑料篩中，采用農用鏈霉素∶百菌清＝1∶1的比例按混合800倍液浸泡20-30min，濾干消毒液后用打孔的塑料袋包裝，及時放置到冷庫中貯藏。