[發明專利]“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養方法

無效

• 申請號: 200710065941.3
• 申請日: 2007-06-08
• 公開（公告）號: CN101066041A
• 公開（公告）日: 2007-11-07
• 發明（設計）人: 龍春林;程治英;羅吉鳳
• 申請（專利權）人: 中國科學院昆明植物研究所
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/02;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 云南協立專利事務所
• 代理人: 馬曉青

技術領域：

本發明屬于植物生物技術領域，具體地，涉及一種蘭花“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養方法。?

背景技術：

蓮瓣蘭特產于云南西部，為珍稀蘭花。其形態優美、株型秀麗；葉片四季長青；花清麗高雅幽香，花色豐富，具有很高的觀賞價值和經濟價值。其中有不少品種為蘭花珍品，如小雪素等，千金難求。蓮瓣蘭種子小，極難發芽，分株繁殖又慢。所以建立組培苗無性系，為蓮瓣蘭珍品的繁殖提供了一條較快速的途徑是極具價值的和現實意義的。現有技術中至今尚未見蓮瓣蘭的種子無菌萌發和組織培養的報道。?

發明內容：

本發明的目的在于提供一種蘭花“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養方法。?

為了實現本發明的上述目的，本發明提供了如下的技術方案：?

“蓮瓣蘭”的無菌播種和組織培養方法，取蓮瓣蘭，經過種子萌發、增殖培養、試管苗誘導、煉苗移栽步驟，蓮瓣蘭種子，播在基本培養基+BA?5mg·L^-1+NAA?5mg·L^-1的種子培養基上培養6-7個月，分化出根狀莖，將根狀莖接入基本培養基+BA3mg·L^-1+NAA5mg·L^-1的增殖培養基上進行增殖培養，待根狀莖逐漸轉綠，部分芽分化出，將帶有芽和根狀莖叢的團塊切割為下來1cm²大小，接入基本培養基+BA3mg·L^-1+IAA0.2mg·L^-1的芽誘導培養基上，根狀莖分化出叢芽，將叢芽團切割為2-3芽塊，接種在基本培養基+NAA1mg·L^-1+香蕉泥20％，pH5.5的生根培養基上3個月，待芽長出1-數條根，苗長至5cm以上時，放在40μmol·m^-1·s^-1光強下煉苗15-30天，當葉片伸展、?植株長高且健壯時，將小苗取出，移栽在濕潤的消過毒的水苔中，蓋塑料膜保濕，保持環境溫度約25℃，通風保濕，待試管苗長出新葉或新根可去除覆蓋膜，常規管理，上述步驟所用基本培養基均為花寶1號即N∶P∶K＝7∶6∶19的美國Hyponex化學公司的產品Hypenox1號2.5g+MS有機成分、鐵鹽和微量元素+AC?0.5g·L^-1+S?2％，瓊脂固化；培養溫度(26±2)℃，連續光照12h·d^-1，光強20-40umol·m^-1·s^-1。?

上述的方法中無菌種子的萌發是摘取未開裂的蓮瓣蘭蒴果，用70％乙醇清洗，然后用75％的乙醇浸泡20s，再用0.2％HgCl₂消毒30min，無菌水沖洗3次，每次10min，把蒴果放在無菌濾紙上，吸干果實表面水分，剪開蒴果，將種子均勻播在種子培養基上。?

上述方法中增殖培養為5個月，根狀莖切割繼代，繼代3-4個月。?

具體實施方式：

下面用本發明的實施例來進一步說明本發明的實質性內容，但本發明的內容并不以此為限。?

實施例1：?

植物名稱：蓮瓣蘭(Cymbidium?lianpan?Tang?et?Wang)?

材料類別：種子?

培養條件：基本培養基為花寶1號(Hypenox?1號，N∶P∶K＝7∶6∶19，美國Hyponex化學公司產品)2.5g+MS有機成分、鐵鹽和微量元素+AC?0.5g·L^-1+S?2％。瓊脂固化。?

①種子播種培養基為：基本培養基+BA?5mg·L^-1+NAA?5mg·L^-1；?

②增殖培養基為：基本培養基+BA3mg·L^-1+NAA?5mg·L^-1；?

③芽的誘導培養基為：基本培養基+BA3mg·L^-1+IAA0.2mg·L^-1；?

④生根培養基為：基本培養基+NAA1mg·L^-1+香蕉泥20％，培養?基pH5.5，培養溫度(26±2)℃，連續光照12h·d^-1，光強20-40umol·m^-1·s^-1。?

生長與分化情況：?