[發明專利]酶法水解制備晶體葉黃素

有效

• 申請號: 200710063188.4
• 申請日: 2007-01-30
• 公開（公告）號: CN101235409A
• 公開（公告）日: 2008-08-06
• 發明（設計）人: 吳光耀;朱梅玲
• 申請（專利權）人: 北京禹光生物科學研究中心有限公司
• 主分類號: C12P23/00
• 分類號: C12P23/00;C12R1/645
• 代理公司: 北京北新智誠知識產權代理有限公司
• 代理人: 郭佩蘭

技術領域

本發明涉及一種酶法水解制備晶體葉黃素，特別是一種酶法水解萬壽菊花葉黃素酯制備晶體葉黃素。

背景技術

我國種植用于生產葉黃素的萬壽菊達30萬畝，年生產干花約5萬噸，制備成含量12-18％的葉黃素酯約5千噸，多以這種半成品出口，再于國外加工成晶體葉黃素出售。

葉黃素是類胡蘿卜素類的一種，在水果、蔬菜中廣泛存在，但含量甚少。葉黃素主要存在于人眼視網膜的視黃斑區，起著向視神經傳遞光能和抗光氧化的作用，葉黃素缺乏引起視黃斑退化，視力減弱直至失明。目前國際上已將其加入到復合維生素中，1995年美國FDA已列為食品添加劑。近年來，還發現它有利于皮膚健康，在降低乳腺癌和結腸癌發病率、預防心血管疾病等方面有廣泛應用。它也是禽類和魚類飼料中著色的添加劑。

自萬壽菊花制備的葉黃素酯每分子中含有兩分子脂肪酸，在生產上從葉黃素酯除去脂肪酸制備葉黃素多采用化學皂化法，即在溶劑存在下加入堿液，皂化后析出葉黃素結晶，用水或乙醇水溶液洗去脂肪酸，葉黃素被純化，脂溶性的葉黃素微膠囊化，成水溶性產物，即美國Kemin公司的主要制備方法。這一方法的優點是容易獲得高純度的葉黃素，但廢液中和后含有大量的鹽污染環境。

進入21世紀，許多人，包括我國科學家都在考慮用酯酶水解葉黃素酯產生葉黃素。在許多微生物中，包括酵母、細菌、和霉菌都可分泌出胞外酯酶，僅Sigma試劑名錄中酯酶就有來自不同物種的19種酯酶之多，目前已報道利用購賣的假絲酵母(Candida?sp。)酯酶，以膽汁酸(cholic?acid)為乳化劑，水解葉黃素酯可獲得含量80％的葉黃素。但還很少有人從生產角度用酶法制備葉黃素。參考文獻有：

J。AOAC(Association?of?Official?Analytical?Chemists)53：181(1970)

J。AOAC(Association?of?Official?Analytical?Chemists)56：748(1973)

J。AOAC(Association?of?Official?Analytical?Chemists)57：511(1974)

發明內容

本發明的目的是提供一種酶法水解制備晶體葉黃素，所采用的酯酶來自食用蕈菌可避免非食用微生物所產生的有害物質造成食用產品污染；乳化劑使用醫學上已獲得安全證明的、用于醫學的微膠囊材、膜劑和涂膜劑的聚乙烯醇(polyvinyl?alcohol)，廢液回收做成飼料添加劑的無污染產品。

為達到上述目的，本發明采用以下步驟：

(1)、食用蕈菌菌絲液體培養，該培養液內含用聚乙烯醇溶液乳化的葉黃素酯誘導液的馬玲薯-葡萄糖培養基，離心分離酯酶，濾液為酯酶粗提液；

(2)、葉黃素酯溶液中，加入聚乙烯醇溶液和(1)中的酯酶提取液，進行酶促水解，水解的溫度為20℃-50℃；

(3)、葉黃素純化；

(4)、真空干燥法脫水干燥葉黃素。

所述的食用蕈菌菌絲為黃白側耳孢子經液體培養得到的黃白側耳菌絲。

所述的進行酶促水解時，葉黃素酯粗提液用量與酯酶提取液用量及聚乙烯醇溶液用量體積比為1∶2∶3。

所述的純化采用冷水(10℃-40℃)、熱水(50℃-80℃)洗滌，以除去酶、聚乙烯醇，其它水溶性物質以及脂肪酸。

純化葉黃素時，用正己烷和/或其它烷烴(丁烷、石油醚等)洗滌除去未水解的葉黃素酯和其它酯溶性化合物。

在水解葉黃素酯時加入抗壞血酸或其它還原劑(維生素E)防止葉黃素被氧化的方法。

所述的聚乙烯醇包括PVA05-88，PVA17-88，PVA-124等。

本發明的優點：

1.本發明使用了食用蕈菌菌絲的酯酶對葉黃素酯進行水解，可不用純化酯酶，也不會有任何有害人體物質摻入，對人是安全的；2.使用已作為藥用輔料的聚乙烯醇為乳化劑，保證了安全性，又降低了生產成本；3.用酶解取代強堿皂化的化學法，而用溫和的生物酶法，有利于生產的安全性，也防止對環境的污染；4.減少了有機溶劑(如丙二醇或乙醇)的使用量；5.也可用于有機溶劑提取其它不含羥基的類胡蘿卜素類純化，水解了甘油酯和其它酯類，從而提高了產品類胡蘿卜素類的含量。

具體實施方式

1.液體培養黃白側耳(Pleurotus?comucopiae)(俗稱小平菇，市場有售)