[發明專利]一種結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒及其檢測方法

無效

• 申請號: 200710059908.X
• 申請日: 2007-10-16
• 公開（公告）號: CN101140284A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發明（設計）人: 李洲;楊發青
• 申請（專利權）人: 天津中新科炬生物制藥有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/543
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標代理有限公司
• 代理人: 關永琴

1.一種結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，包括：檢測血液中抗TB抗體試紙條及放置檢測試紙條的塑料盒，其特征在于：檢測血液中抗體試紙條由在NC膜上將TB抗原38KD，16KD混合包被到NC膜的下部，形成檢測線(T)線，抗鼠IgG包被在NC膜的上部，形成質控線(C)線；用抗人IgG標記納米級顯色顆粒制備成標記物墊；NC膜、標記物墊、上樣墊和吸樣墊粘貼組裝到塑料板上構成。

2.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于抗人IgG為鼠抗人IgG、羊抗人IgG或金黃色葡萄球菌蛋白A(SPA)。

3.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于標記顯色顆粒為膠體金顆粒，也可用乳膠顆粒或納米磁珠。

4.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于樣本稀釋液為生理鹽水或pH7.2的0.01M磷酸鹽緩沖液(PBS)。

5.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于所述的上樣墊為玻璃纖維膜或無紡布，吸樣墊由吸水濾紙構成。

6.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于，抗原的包被方法為：以0.01M?pH?7.2磷酸鹽緩沖液(PBS)將抗原配制成38KD為0.5mg/ml，16KD為0.3mg/ml的混合溶液，在噴膜儀在NC膜上以1ul/cm的參數進行劃線，包被T線，同時在NC膜上包被抗鼠IgG作為質控線。包被后在干燥房干燥8-10hr，備用。

7.根據根據權利要求1、2和3所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于，鼠抗人IgG或羊抗人IgG或(SPA)標記膠體金顆粒的方法為：取100ml膠體金液放在小燒杯內，用0.2M?K₂CO₃調至pH7.6，按100ml膠體金液加入1mg鼠抗人IgG或羊抗人IgG或SPA，室溫攪拌2小時，加入保護劑，封閉20min，12000rpm離心30分鐘，棄上清，用金標工作液復溶至100ml，按每毫升金標溶液鋪22cm²的比例分別均勻地鋪在無紡布上，再置干燥房，溫度20-25℃，濕度在小于30％，干燥2-4小時，制成膠體金墊，干燥備用。

8.根據根據權利要求1、2、3所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于，乳膠顆粒或納米磁珠標記鼠抗人IgG或羊抗人IgG或SPA方法為：取10ml?1％乳膠顆粒或納米磁珠，用0.1M?pH4.7的MES溶液清洗2次，復溶于MES中，加入20mg?EDC，25mg的NHS，37℃作用20分鐘，用50mM?pH8.5的硼酸鹽緩沖液清洗1次，復溶于硼酸鹽緩沖液中，加入1mg鼠抗人IgG或羊抗人IgG或SPA，37℃作用2小時，加入保護劑，封閉20min，12000rpm離心30分鐘，棄上清，用工作液復溶至100ml，按每毫升溶液鋪22cm²的比例分別均勻地鋪在無紡布上，再置干燥房，溫度20-25℃，濕度在小于30％，干燥2-4小時，制成標記物墊，干燥備用。

9.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒，其特征在于，結核抗體金測試盒裝配方法為：試紙條裝配：在干燥室內，相對濕度≤30％，取PVC板，將已包被的NC膜放置在PVC板的中部粘貼，在NC膜(T)線一側搭接標記物墊(搭標記物墊的三分之一)粘貼，在標記物墊一側搭接粘貼上樣墊(搭上樣墊的十分之一)；在NC膜(C)線一側搭接吸樣墊(搭吸樣墊的十分之一)；最上面貼一層標志膜，用裁剪機將貼好塑料板切成3mm或4mm寬的試紙條，將裁切好的試紙條正確放在塑料盒底卡的槽中，放好后將盒蓋蓋好，壓緊即得。

10.根據權利要求1所述的結核分枝桿菌抗體快速診斷試劑盒的檢測方法，其特征在于，檢測時將少量被檢血清或血漿樣品3ul～5ul加在試紙條的NC膜上，然后在加樣端加入樣品稀釋液，加樣完成后觀察免疫反應結果，在15分鐘內根據C、T線的出現情況判定檢測結果，實現對TB抗體的快速輔助診斷。