[發(fā)明專利]一種麻風(fēng)樹的高效離體再生方法

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710059901.8
• 申請(qǐng)日: 2007-10-16
• 公開（公告）號(hào): CN101138320A
• 公開（公告）日: 2008-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊靜慧;劉艷軍;張偉玉;楊恩芹
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津農(nóng)學(xué)院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00;C12N5/04
• 代理公司: 天津盛理知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 王來佳

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種麻風(fēng)樹的高效離體再生方法。

背景技術(shù)

麻風(fēng)樹又名假花生，臭油桐屬大戟科的半肉質(zhì)小喬木或大灌木，全株有毒。莖、葉、樹皮均有豐富的白色乳汁，內(nèi)含大量毒蛋白。種子毒蛋白濃度最高，毒性與蓖麻毒蛋白類似。麻風(fēng)樹種籽經(jīng)過壓榨、脂化作用處理可提取清澈的黃金色液體燃料油，含油量約為60％，超過大豆、油菜等油料作物。這種新型燃油適用于各種柴油發(fā)動(dòng)機(jī)，并在硫含量、一氧化碳和鉛等的排放量以及其他技術(shù)上優(yōu)于國內(nèi)零號(hào)柴油，是一種低成本高環(huán)保燃料。將這種生態(tài)燃料油與普通柴油按1∶9的比例混合使用，可大大降低車輛廢氣中硫和鉛的排放，既減少了污染，又降低了車輛的運(yùn)營成本。德國戴姆勒一克萊斯勒實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)證明，麻風(fēng)樹籽油幾乎在各個(gè)方面都明顯勝過傳統(tǒng)的柴油，特別是它的硫含量非常低，燃燒時(shí)沒有氣味，幾乎不產(chǎn)生碳黑。隨著我國改革開放的不斷深入，全球經(jīng)濟(jì)一體化的進(jìn)程形勢(shì)加大，中國的經(jīng)濟(jì)水平進(jìn)一步提高，人們對(duì)能源的需求有增無減。據(jù)專家預(yù)測(cè)，到2010年，世界柴油需求量將從38％增加到70％，屆時(shí)會(huì)出現(xiàn)供給嚴(yán)重不足。這為生物柴油的發(fā)展提供了廣闊空間。發(fā)展生物柴油可促進(jìn)中國農(nóng)林產(chǎn)業(yè)發(fā)展，走出一條農(nóng)林產(chǎn)品向工業(yè)產(chǎn)品轉(zhuǎn)化的富農(nóng)強(qiáng)農(nóng)的發(fā)展之路。我國是世界石油消費(fèi)第二大國，開源截流是當(dāng)務(wù)之急。從開源上講，就是要多元化，除了開發(fā)國內(nèi)、國外地下石油資源外，開發(fā)生物柴油也是一個(gè)補(bǔ)充，可見發(fā)展麻風(fēng)樹前景廣闊。

麻風(fēng)樹是一種多年生灌木或喬木，耐旱性強(qiáng)，對(duì)土攘肥力和濕度要求不高，環(huán)境適應(yīng)能力強(qiáng)，可以種植在其他植物不易生長(zhǎng)的土地上，大面積推廣可以使貧膺的土地重新變得肥沃，是干旱地區(qū)理想的造林樹種，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和環(huán)保價(jià)值。由于我國地域遼闊，要想實(shí)現(xiàn)麻風(fēng)樹在更大范圍進(jìn)行推廣，還要對(duì)其性狀進(jìn)行相應(yīng)的改造，如我國有大面積的鹽堿地，如果能夠種植如麻風(fēng)樹類的經(jīng)濟(jì)植物意義重大，因此通過育種技術(shù)增加麻風(fēng)樹的多種生物學(xué)特性將有極其重要的意義。

提高轉(zhuǎn)化效率一直是植物遺傳轉(zhuǎn)化研究的一個(gè)重要目標(biāo)。為了提高植物的遺產(chǎn)轉(zhuǎn)化效率，研究者們不斷探索有利條件。植物遺傳轉(zhuǎn)化研究是根據(jù)植物細(xì)胞的全能性，運(yùn)用多種現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，對(duì)植物加以改造。因此，農(nóng)桿菌介導(dǎo)的轉(zhuǎn)化首先是要有高的再生率，其次是有效的抗性篩選標(biāo)記或方法，有強(qiáng)的啟動(dòng)子和高效表達(dá)的載體等。但是，目前植物的遺傳轉(zhuǎn)化研究還存在許多問題，主要為轉(zhuǎn)化效率低。轉(zhuǎn)化基因植物出現(xiàn)以來，轉(zhuǎn)化效率低是多種植物遺傳轉(zhuǎn)化遇到的困難，如基因槍法重復(fù)性差，單子葉植物不易被農(nóng)桿菌侵染，用于篩選轉(zhuǎn)化材料的抗生素抑制材料的再生等。因此建立高效的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)仍然是該領(lǐng)域的主要任務(wù)。而建立高效的轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的關(guān)鍵步驟就是提高受體的外植體的離體再生率。

由于麻風(fēng)樹近年才被人們重視，因此目前我國在麻風(fēng)樹育種方面剛剛開始，由于麻風(fēng)樹多為野生狀態(tài)，遺傳資源簡(jiǎn)單，又因其為木本植物，采用常規(guī)育種來改變其遺傳性狀相當(dāng)困難。因此采用現(xiàn)代生物技術(shù)，如基因轉(zhuǎn)化等手段來輔助育種必然成為首選。目前國際一些發(fā)達(dá)國家已經(jīng)開始著手進(jìn)行對(duì)麻風(fēng)樹的分子水平育種工作。由于提高轉(zhuǎn)化效率的關(guān)鍵步驟就是提高受體的外植體的離體再生率，因此麻風(fēng)樹的高效離體再生技術(shù)成為研究的重要課題。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的就是要通過組織培養(yǎng)技術(shù)提供一種麻風(fēng)樹的高效離體再生方法。

本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的：

一種麻風(fēng)樹的高效離體再生方法的步驟是：

(1).挑取飽滿的麻風(fēng)樹種子，經(jīng)消毒處理后，剝?nèi)ヅ呷椋瑢⑴呓臃N在MS培養(yǎng)基上萌發(fā)，得到無菌苗；

(2).切取無菌苗下胚軸接種到MS+1.0mg/LBA+2.0mg/LIAA的分化培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出再生的芽；

(3).將下胚軸再生的芽接種到MS+1.0mg/LBA+2.0mg/LIAA的分化培養(yǎng)基上繼代，進(jìn)行增粗培養(yǎng)，得到長(zhǎng)勢(shì)粗壯的麻風(fēng)樹再生苗；

(4).將長(zhǎng)勢(shì)粗壯的麻風(fēng)樹再生苗接種到MS+1.0mg/LIAA培養(yǎng)基上誘導(dǎo)生根；

(5).待麻風(fēng)樹再生苗根長(zhǎng)到2～3cm時(shí)進(jìn)行移栽，即完成麻風(fēng)樹的離體再生。

而且，對(duì)飽滿麻風(fēng)樹種子所采用的消毒方法是：將飽滿麻風(fēng)樹種子經(jīng)自來水沖洗后，去掉外種皮，用95％乙醇浸泡30S，0.025％HgCl₂溶液表面滅菌15min，無菌水沖洗浸泡3～5次；將胚接種在MS培養(yǎng)基上萌發(fā)的培養(yǎng)條件是：溫度25℃，光照12h/d，光照光強(qiáng)為1600～2000lx。