[發(fā)明專利]一種酶轉化生產(chǎn)L－半胱氨酸的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710058193.6
• 申請日: 2007-07-18
• 公開（公告）號: CN101348809A
• 公開（公告）日: 2009-01-21
• 發(fā)明（設計）人: 陳寧;懷麗華;馬雷;徐慶陽;劉淑云
• 申請（專利權）人: 天津科技大學
• 主分類號: C12P13/12
• 分類號: C12P13/12;C12R1/40
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、本發(fā)明提供的一種利用惡臭假單胞菌(Pseudomonas?putida)TS-1138酶法轉化DL-2-氨基-Δ2噻唑啉-4羧酸(DL-2-Amino-Δ2thiazoline-4-Carboxylic?Acid，DL-ATC)合成L-半胱氨酸的生產(chǎn)工藝，包括：

A.將惡臭假單胞菌(Pseudomonas?putida)TS-1138進行常規(guī)擴大培養(yǎng)

B.將步驟A中獲得的擴大培養(yǎng)的菌種接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基進行培養(yǎng)：產(chǎn)酶培養(yǎng)基中碳源含量應為0.1％～30％的干基培養(yǎng)基重，氮碳比N∶C應介于1∶100～50∶100之間，無機鹽含量應為0.1～10％，DL-ATC的添加量為0.1％～0.9％。產(chǎn)酶培養(yǎng)基的初始PH6.0～9.0，培養(yǎng)溫度25℃～33℃，振蕩培養(yǎng)或發(fā)酵罐培養(yǎng)12～36小時，接種量為0.01％～20％(V/V)；在培養(yǎng)過程中流加氨水調(diào)節(jié)發(fā)酵培養(yǎng)基的PH6.2～7.0；

C.將步驟B培養(yǎng)到20～24小時，離心分離菌體10min(4000r/min，4℃)，棄去上清液，用pH?7.4的PBS緩沖液(磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉-氯化鈉緩沖液)反復洗滌菌體三次并重懸，在pH?7.4的PBS緩沖液中添加的濕菌體，制備酶促反應所用細胞懸液，細胞濃度為100g/L～500g/L。

D.將步驟C制備的細胞懸液，加入到底物(DL-ATC)溶液中，進行酶促反應。其中底物溶液的濃度為0.05％～5.0％，在0～9小時加入，反應溫度為36～42℃，反應時間為2～12小時。酶促反應結束后，離心分離菌體，取上清液，采用酸式茚三酮法測定L-半胱氨酸含量。

2、根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于B步產(chǎn)酶培養(yǎng)基中的碳源為：糖，即葡萄糖，蔗糖，乳糖，麥芽糖，山梨糖；或甘油；或低分子醇，乙醇；碳源含量最適范圍為10％～20％。

3、根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于B步產(chǎn)酶培養(yǎng)基中的氮源為：氨或銨鹽，即氯化銨，硫酸銨，碳酸氫銨，硝酸銨；或有機氮，即牛肉膏，蛋白胨，酵母粉，玉米漿，尿素。

4、根據(jù)權利要求1所述的生產(chǎn)工藝，其特征在于B步產(chǎn)酶培養(yǎng)基中的無機鹽為：磷酸鉀，硫酸鎂，硫酸亞鐵，氯化鈉氨或硫酸錳。