[發明專利]栽培小麥Brock中一個受白粉菌誘導應答的基因cDNA序列及其獲得方法

無效

• 申請號: 200710058140.4
• 申請日: 2007-07-16
• 公開（公告）號: CN101126091A
• 公開（公告）日: 2008-02-20
• 發明（設計）人: 王振英;李剛;彭永康
• 申請（專利權）人: 天津師范大學
• 主分類號: C12N15/29
• 分類號: C12N15/29;C07K14/415
• 代理公司: 天津市杰盈專利代理有限公司
• 代理人: 朱紅星

技術領域

本發明屬于農業生物基因工程技術領域，特別涉及栽培小麥Brock中一個受白粉菌誘導應答的cDNA序列及其獲得方法。

技術背景

栽培小麥Brock強抗白粉病，對華北地區流行的15號優勢小種免疫。抗白粉病特性分析證實，Brock存在一個抗白粉病新基因，位于染色體3BL上(Wang?et?al.，PlantProduction?Science，2004，7(3)：319；Wang?et?al.，Plant?Production?Science，2005，8(5)：578)。由于小麥中抗白粉病基因抗性退化和抗源的缺乏，克隆Brock中的新基因，對于抗病機理研究和抗白粉病育種都有重要意義，為此，我們利用經白粉菌15號優勢小種脅迫5d的Brock總RNA為模板，以帶接頭的OligodT為逆轉錄引物，逆轉錄合成cDNA第一鏈，然后根據已發表的NBS類抗病基因同源序列設計簡并引物進行PCR，結果獲得一條比預期分子量大的cDNA片段(NBS片段一般為500bp左右)，將其克隆并測序，發現該片段兩端分別有上游和接頭引物，進而進行測序，發現該片段與報道的小麥的TCTP(translationally?controlled?tumor?protein，TCTP)基因的cDNA序列(gi|21070378)有97％的同源性。

翻譯控制腫瘤蛋白(translationally?controlled?tumor?protein，TCTP)最初是在鼠腫瘤細胞中被發現的(Chitpatima?S，et?al.，Nucleic?Acids?Res，1988，16(5)：2350)，受翻譯過程所阻遏，與腫瘤生長相關(Bohm?H，et?al.，Biochem.Int，1989，19：277)，因此被命名為翻譯控制腫瘤蛋白(Gross?B，et?al.，Nucleic?Acids?Research，1989，17：8367；Bommer?UA，et?al.，Cell?Mol?Biol?Res，1994，40：633)，但是以后的研究發現TCTP的表達也受轉錄水平的調控(Xu?A，et?al.，Biochem?J，1999，342：683；Kang?B?S，et?al.，J?Genet，1996，18(2)：143)。除腫瘤細胞外，TCTP還存在于許多除腎細胞外的人類的正常細胞中(ThawP，et?al.，Nat?Struct?Biol，2001，8(8)：701)，并先后在許多生物體內發現TCTP，其中包括植物、蚯蚓、寄生蟲、水螅、酵母等。研究表明，TCTP具有多種生物學功能，如細胞外組胺釋放(MacDonald?S?M，et?al.，Science，1995，269：688)，微管和鈣結合蛋白(Yannick?G，et?al.，Journal?of?Cell?Science，1999，112：1257)、抗凋亡等(Sinha?P，et?al.，Molecular?and?Biochemical?Parasitology，2000，121：107)，并且發現TCTP在高等植物中也廣泛存在，重金屬(Al)脅迫(Vladimir?E，et?al.，Journal?of?Experiment?Botany，2003，54：2745)、黑暗誘導(Kimiyo?SO，et?al.，Plant?Cell?Physiol，1998，39(3)：357)均可引起TCTP?mRNA的積累和表達。TCTP的這一特性啟示我們，它可能也與小麥的抗白粉病特性有關。為此，我們用RACE方法，獲得了該基因的全長cDNA，并對該cDNA進行了基因的結構分析、氨基酸序列推導、特征結構預測和白粉菌誘導實驗，我們獲得了Brock中的TCTP全長基因，功能分析證實了我們的推測，它參與了小麥對白粉菌的抗性反應。

發明內容

本發明的目的在于公開了栽培小麥Brock中一個受白粉菌誘導應答的新基因cDNA序列。

本發明的另一個目的在于公開了栽培小麥Brock中一個受白粉菌誘導應答的TCTP基因cDNA序列編碼的168aa多肽鏈氨基酸序列。該多肽鏈具有2個特征結構區(TCTP1和TCTP2)和7個可能的功能位點。

本發明的再一個目的在于公開了栽培小麥Brock中一個受白粉菌誘導應答的新基因cDNA序列的獲得方法。