[發明專利]對硝基苯－β－D－葡糖苷的合成及其應用

無效

• 申請號: 200710057848.8
• 申請日: 2007-07-05
• 公開（公告）號: CN101337982A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發明（設計）人: 孫家莉;王金良;陳麗宇
• 申請（專利權）人: 天津市醫藥科學研究所
• 主分類號: C07H15/203
• 分類號: C07H15/203;G01N21/78;C12Q1/04
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種對硝基苯-β-D-葡糖苷的合成，其特征在于該對硝基苯-β-D-葡糖苷是以D-葡萄糖為原料，經醋酐進行乙酰化，以溴試劑溴化后與對硝基苯酚縮合，然后以甲醇鈉水解制得。

2、根據權利要求1所述的對硝基苯-β-D-葡糖苷的合成，其特征是所述的對硝基苯-β-D-葡糖苷經過以下步驟制得：

——β-五乙酰葡糖的制備：以葡萄糖為原料進行乙酰化反應，取干燥的D-葡萄糖200g，無水醋酸鈉0.1-0.8倍(w/w)，醋酐5-8倍(w/v)，溫熱溶解，水浴上加熱回流并攪拌2h，攪拌下倒入5-10倍于醋酐量的冰水中，攪拌1個小時，析出大量淺色結晶，過濾，水洗結晶，干燥，制得β-五乙酰葡糖粗品，用5-8倍量95％乙醇重結晶，得到β-五乙酰葡糖結晶220g，熔點mp130-132℃；此步反應醋酐的加入量最好為葡萄糖量的6倍(g/v)以上，維持體系有效回流，以防止葡萄糖的焦化或難溶。

——溴試劑的制備：3g紅磷于20-30ml冰醋酸中，冰浴下逐漸滴入15-20g溴，完畢后放置半小時，過濾得溴試劑，密封保存于冰箱內備用。

——溴-α-D-四乙酰基葡糖的制備：50g?β-五乙酰葡糖，70-80ml溴試劑攪拌溶解，放置2小時，加入150ml氯仿混合，將混合物倒入5000ml冰水中，分出氯仿層以等體積的冰水洗兩次，再用等體積的飽和的碳酸氫鈉洗一次，取氯仿層加無水硫酸鈉攪拌后靜止過夜，次日在50-60℃水浴減壓蒸去氯仿，得一糖漿。溶于等體積的乙醚中0℃放置過夜，得40g粗品，用2倍量乙醚重結晶得35g，mp84℃。

——對硝基苯-β-D-四乙酰基葡糖苷的制備：取50g溴-α-D-四乙酰基葡糖，33-41g的對硝基苯酚，于500ml丙酮中攪拌5-10分鐘使之溶解，加1mol/LNaOH液250-300ml，攪拌2-3分鐘，溶解，于冰箱放置過夜。收集長針狀結晶，用水洗至白色。以20-30倍量無水乙醇重結晶，得長針狀結晶23g，mp174-176℃。

——對硝基苯-β-D-葡糖苷的制備：取上步的對硝基苯-β-D-四乙酰基葡糖苷進行水解反應，20g對硝基苯-β-D-四乙酰基葡糖苷懸浮于200-500ml無水甲醇中，37℃保溫5-15分鐘，加入1mol/L甲醇鈉無水甲醇液10-40ml，混勻，溶解，冰箱放置過夜，收集結晶，得12g粗品。

——精制：12g對硝基苯-β-D葡糖苷粗品，加20-30倍量的無水甲醇、活性炭脫色，重結晶后得白色細針狀結晶10g，真空下干燥。mp164-166℃。

3、一種權利要求1和2中制得的對硝基苯-β-D-葡糖苷在細菌學β-葡糖苷酶的檢測中的應用，能在20分鐘內鑒別白色念珠菌和都柏林念珠菌，并鑒定腸球菌。其步驟如下：

——材料

1).底物紙片的制作：6mm圓形濾紙片，再將濾紙片置于玻璃皿中，高溫滅菌。精密稱取4mg對硝基苯-β-D-葡糖苷溶于1ml生理鹽水中，不停攪拌，以均勻分配濾紙片上的底物，置35℃干燥待用。

2).緩沖液：磷酸鹽緩沖液pH5.5。

3).終止液：0.1mol/LNaOH溶液。

4).菌株：臨床分離的白色念珠菌、鏈球菌、腸球菌、腸桿菌。質控用標準菌株：大腸埃希氏ATCC?25922、金黃色葡萄球菌ATCC25923、銅綠假單胞菌ATCC27853。

——操作：

(1)在濾紙片上滴加pH5.5磷酸鹽緩沖液，浸濕紙片。

(2)用接種環挑取細菌菌落濃涂于紙片上，溫育于35℃?20分鐘。

(3)加一滴0.1mol/LNaOH溶液于紙片上，觀察涂菌落處有無黃色出現。

——判定：

在念珠菌中鑒定，白色念珠菌為陽性、都柏林念珠菌為陰性。

在鏈球菌屬，唯有腸球菌為陽性。