[發(fā)明專利]一種分離和固定化酶的免疫磁性微球的制備方法及其應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200710057435.X
• 申請日: 2007-05-23
• 公開（公告）號: CN101092614A
• 公開（公告）日: 2007-12-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 白鋼;余養(yǎng)盛;劉春琴;曹宇;楊文博
• 申請（專利權(quán)）人: 南開大學(xué)
• 主分類號: C12N11/14
• 分類號: C12N11/14;C12N9/00
• 代理公司: 天津佳盟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 侯力

1、一種分離純化和固定化目的酶的免疫磁性微球的制備方法，其特征在于：將活化后的磁性微球與金黃色葡萄球菌蛋白A溶液反應(yīng)，采用PBS緩沖液充分洗滌；再將耦聯(lián)有金黃色葡萄球菌蛋白A的磁性微球與抗目的酶的IgG抗體的多抗血清或者單抗腹水進行吸附連接；經(jīng)PBS充分洗凈后，采用戊二醛或二甲基庚二酸酯將金黃色葡萄球菌蛋白A和IgG交聯(lián)固定在磁性微球表面，最后加入TBS緩沖液終止反應(yīng)，充分洗凈后即得到可用于目的酶的分離純化和固定化的磁性微球，其酶的耦聯(lián)量為1～10mg/mL。

2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所采用的磁性微球是含有羥基活性基團的磁性微球，即瓊脂糖磁性微球、纖維素磁性微球或聚乙烯醇磁性微球。

3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述的目的酶為L-半胱氨酸脫巰基酶，抗目的酶的IgG抗體是抗L-半胱氨酸脫巰基酶抗體。

4、一種權(quán)利要求1所述的方法制備的免疫磁性微球的應(yīng)用，其特征在于將免疫磁性微球用于從復(fù)雜的細(xì)胞裂解液中一步分離純化目的酶；其分離純化過程是將耦聯(lián)有抗目的酶抗體的免疫磁性微球，與細(xì)胞裂解液于2～8℃振蕩反應(yīng)2～12小時；然后將其置于磁珠收集器上用于吸附固定磁性微球，除去反應(yīng)液，經(jīng)PBS充分洗凈后，采用pH1.5～3.5的甘氨酸-鹽酸緩沖液于2～8℃振蕩解離吸附的目的酶；磁性分離微球，收集解離液，立即用pH6.5～10.0的PB緩沖液中和，可得到純化的目的酶；該微球用PBS洗凈后，于2～8℃保存可重復(fù)使用。

5、根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于所述的免疫磁性微球是固定有權(quán)利要求3所述的抗L-半胱氨酸脫巰基酶抗體的免疫磁性微球，并用于L-半胱氨酸的合成，具體過程如下：將上述免疫磁性微球加入到惡臭假單胞菌TS1138菌體裂解液中，分離吸附L-半胱氨酸脫巰基酶，然后收集免疫磁性微球，除去脫巰基酶的反應(yīng)液可用于后續(xù)的微生物酶法轉(zhuǎn)化L-半胱氨酸，提高合成L-半胱氨酸的轉(zhuǎn)化率。

6、一種權(quán)利要求1所述的方法制備的免疫磁性微球的應(yīng)用，其特征在于將免疫磁性微球用于目的酶的固定化，其過程是：將耦聯(lián)有抗目的酶抗體的免疫磁性微球，與細(xì)胞裂解液混合，于2～8℃振蕩反應(yīng)2～12小時；然后將其置于磁珠收集器上用于吸附固定磁性微球，除去反應(yīng)液，經(jīng)PBS充分洗凈后，固定有目的酶的免疫磁性微球即可用于對特定底物進行連續(xù)催化反應(yīng)。