[發(fā)明專利]犬、貓科動(dòng)物重要疫病病原膠體金銀聯(lián)合檢測(cè)試紙及其制備技術(shù)

無效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710055759.X
• 申請(qǐng)日: 2007-06-13
• 公開（公告）號(hào): CN101074959A
• 公開（公告）日: 2007-11-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 夏咸柱;楊松濤;黃耕;王承宇;高玉偉;王鐵成;侯小強(qiáng);高明華;蘇建青
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院軍事獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): G01N33/577
• 分類號(hào): G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司
• 代理人: 陳宏偉

技術(shù)領(lǐng)域：

本發(fā)明涉及一種犬、貓科動(dòng)物重要疫病病原膠體金銀聯(lián)合檢測(cè)試紙及其制備方法，用于犬、貓科動(dòng)物狂犬病、犬瘟熱、貓瘟熱和犬細(xì)小病毒病等重要疫病的快速檢測(cè)、診斷，屬于動(dòng)物疫病檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

犬狂犬病、犬瘟熱、貓瘟熱和犬細(xì)小病毒病等犬、貓科動(dòng)物重要疫病不僅嚴(yán)重危害我國(guó)毛皮經(jīng)濟(jì)動(dòng)物產(chǎn)業(yè)，而且嚴(yán)重威脅著虎、獅、狼等多種珍希野生動(dòng)物的健康，有的還可導(dǎo)致人的發(fā)病死亡。要從根本上控制這些疫病，首要的是對(duì)上述疫病的發(fā)生、流行作出及時(shí)、準(zhǔn)確的監(jiān)測(cè)。對(duì)于犬貓科動(dòng)物重要疫病，目前國(guó)際上常用的病原檢測(cè)方法有病毒分離、電鏡觀察、PCR或RT-PCR等方法，但這些方法都需要一定的儀器設(shè)備和較高的操作技術(shù)，影響了其在流行病學(xué)監(jiān)測(cè)方面的應(yīng)用。

膠體金是近年來發(fā)展起來的一種檢測(cè)技術(shù)，由Faulk和Taylor(1971)首先用于免疫電鏡，現(xiàn)在成了熒光素、放射性同位素和酶標(biāo)記以外的一大補(bǔ)充。膠體金試紙是利用抗原抗體反應(yīng)及免疫層析原理，將抗原或抗體以膠體金標(biāo)記，當(dāng)待檢樣品中含有與抗原或抗體特異結(jié)合的抗體或抗原時(shí)，就會(huì)發(fā)生聚集而產(chǎn)生肉眼可見的色帶，具有簡(jiǎn)便、快速，結(jié)果直觀、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容：

本發(fā)明提供了一種犬、貓科動(dòng)物重要疫病病原膠體金銀聯(lián)合檢測(cè)試紙，能夠簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確地對(duì)犬、貓科動(dòng)物體內(nèi)含有的狂犬病病毒(RV)、犬瘟熱病毒(CDV)、貓瘟熱病毒(FPV)和犬細(xì)小病毒(CPV)等病原作出檢測(cè)。

本發(fā)明還公開了上述檢測(cè)試紙的制備工藝，適合于工業(yè)化生產(chǎn)。

本發(fā)明的解決方案是根據(jù)抗原抗體能特異結(jié)合的免疫學(xué)基本原理，利用膠體金免疫層析技術(shù)和銀染加強(qiáng)技術(shù)，將膠體金標(biāo)記的鼠源RV、CDV、FPV和CPV等單抗混合包被在玻璃纖維素膜上，制成結(jié)合墊；分別將純化的犬抗RV、CDV、FPV和CPV等的IgG包被在硝酸纖維素膜(NC)的檢測(cè)線R、D、F、P處，將兔抗鼠IgG包被在硝酸纖維素膜的質(zhì)控線C處，制成檢測(cè)膜；當(dāng)被檢樣品中含有相應(yīng)病毒時(shí)，可先與相應(yīng)金標(biāo)鼠源單抗結(jié)合，然后在層析作用下與相應(yīng)檢測(cè)線上的二抗結(jié)合并富集，再經(jīng)銀染液加強(qiáng)染色后形成肉眼可見的色帶，進(jìn)而根據(jù)顯色結(jié)果進(jìn)行判定。

本發(fā)明的具體制備工藝如下：是按附圖1所示位置分別將相應(yīng)試劑與材料噴點(diǎn)或包被于玻璃纖維素膜和硝酸纖維素膜，組成犬、貓科動(dòng)物重要疫病病原聯(lián)合檢測(cè)試紙。將由玻璃纖維素膜制成的樣品墊置于加樣孔下；樣品墊連接由玻璃纖維素膜制成的結(jié)合墊，結(jié)合墊上包被有膠體金標(biāo)記的鼠源抗RV、CDV、FPV和CPV等單克隆抗體；結(jié)合墊后連接由NC膜制成的檢測(cè)膜，檢測(cè)膜上可有根據(jù)需要設(shè)置多條檢測(cè)線和1條質(zhì)控線，其中檢測(cè)線R、D、F、P等分別為純化的犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG包被而成，質(zhì)控線(C)為兔抗鼠二抗；檢測(cè)膜后面連接有吸收墊；最后再按金標(biāo)層析試紙制備要求，進(jìn)行粘連、壓制和裁切，制成該抗體聯(lián)合檢測(cè)試紙。

本發(fā)明與現(xiàn)有的技術(shù)相比較具有如下優(yōu)點(diǎn)：檢測(cè)試紙簡(jiǎn)便、適用、快速、經(jīng)濟(jì)、無污染、易操作和判讀，不需要借助其它儀器設(shè)備，并可同時(shí)對(duì)多種犬、貓科動(dòng)物重要疫病病原進(jìn)行檢測(cè)，特別適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)和流行病學(xué)調(diào)查等。本發(fā)明的制備方法科學(xué)、成本低、穩(wěn)定性高、重復(fù)性好，易于制造、保存和運(yùn)輸。

附圖說明

圖1是本發(fā)明檢測(cè)試紙的結(jié)構(gòu)示意圖：

圖2是本發(fā)明檢測(cè)試紙剖面圖。

1-塑料夾、2-加樣孔、3-觀察孔、4-樣品墊、5-結(jié)合墊(由玻璃纖維素膜制成，上包被有金標(biāo)RV、CDV、FPV和CPV等鼠源單抗)、6-檢測(cè)膜(由硝酸纖維素膜制成，上噴點(diǎn)有多條檢測(cè)線和1條質(zhì)控線，其中R、D、F、P等為檢測(cè)線，分別包被有純化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C為質(zhì)控線，包被有兔抗鼠二抗)、7-吸收墊、8-襯板。

具體實(shí)施方式

通過以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對(duì)本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動(dòng)或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

根據(jù)圖1所示，本發(fā)明檢測(cè)試紙結(jié)構(gòu)如下：