[發明專利]犬、貓科動物重要疫病病原膠體金銀聯合檢測試紙及其制備技術

無效

• 申請號: 200710055759.X
• 申請日: 2007-06-13
• 公開（公告）號: CN101074959A
• 公開（公告）日: 2007-11-21
• 發明（設計）人: 夏咸柱;楊松濤;黃耕;王承宇;高玉偉;王鐵成;侯小強;高明華;蘇建青
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍軍事醫學科學院軍事獸醫研究所
• 主分類號: G01N33/577
• 分類號: G01N33/577;G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司
• 代理人: 陳宏偉

1、一種犬、貓科動物重要疫病抗原膠體金銀聯合檢測測試紙，其特征在于：襯板8封套在塑料夾1內，塑料夾1的表面開設有加樣孔2和觀察孔3，襯板8的表面上組裝有經過處理的樣品墊4、結合墊5、檢測膜6和吸收墊7。其中，結合墊5由玻璃纖維素膜制成，上包被有金標RV、CDV、FPV和CPV等鼠源單抗；檢測膜6由硝酸纖維素膜制成，上噴點有多條檢測線和1條質控線，R、D、F、P等為檢測線，分別包被有純化犬抗RV、CDV、FPV和CPV等IgG；C為質控線，包被有兔抗鼠二抗；檢測膜與吸收墊7連接。

2、根據權利要求1所述檢測試紙的制備方法，包括下述步驟：

1)RV、CDV、FPV與CPV等病原單抗和多抗IgG的制備：分別用RV、CDV、FPV與CPV等病原接種各自敏感細胞，培養增殖各病毒，經濃縮提純后分別免疫Balb/c小鼠和家犬，制備各病毒的單抗和多抗血清，并以此進一步制備其單抗與多抗IgG，于-30℃保存備用；

2)RV、CDV、FPV與CPV等病原固相免疫吸附載體的制備：應用所制備的RV、CDV、FPV與CPV等病原多抗IgG包被磁珠、乳膠顆粒等固相載體，分別制備上述病原的高效免疫吸附載體，并按適當比例混合，制成聯合病原固相免疫吸附載體，加入防腐劑，于4℃保存備用；在樣品前處理時，取待檢樣品3-5ml，加入適量固相免疫吸附載體，室溫作用20-30分鐘，離心或置于磁珠架沉淀磁珠，棄去上清，于所留免疫吸附載體中加50-100ml抗原抗體解離液用于檢測；

3)金標RV、CDV、FPV與CPV單抗IgG的制備：采用膠體金蛋白標記技術，分別用膠體金標記所制備的RV、CDV、FPV與CPV單抗IgG，制得上述病毒的金標IgG，制成抗原捕捉劑，加防腐劑，于4℃保存備用；

4)兔抗鼠IgG制備：以Balb/c小鼠IgG免疫家兔制備兔抗鼠血清，并從中提取IgG，制備兔抗鼠IgG，加防腐劑，于-30℃保存備用；

5)結合墊制備：將所制金標抗原捕捉劑噴涂于玻璃纖維素膜上，制成反應膜，干燥保存備用；

6)檢測膜制備：將所制備的RV、CDV、FPV與CPV多抗IgG和兔抗鼠IgG，分別噴點于硝酸纖維素膜(NC)的檢測線R、D、F、P處和質控線C處，制成檢測膜，干燥保存備用；

7)檢測試紙組裝：按膠體金層析檢測試紙制備要求，如圖將上述所制備和選購的材料進行粘連、壓制和裁切成檢測試紙條，裝入塑料夾內制成的檢測卡，加干燥劑并分裝、封閉于的塑料小袋，干燥保存；

8)銀加強法相應試劑的配制：

活化液的配制：以去離子水配制0.05mol/L、PH3.8的檸檬酸鹽緩沖液；

銀染液的配制：將乙酸銀、對苯二酚、阿拉伯樹膠溶于去離子水中，使其終濃度分別為0.11％、0.35％-1.7％和7％-10％；

定影液的配制：20％的硫代硫酸鈉水溶液。