[發(fā)明專利]一種從無花果樹樹葉中提取超氧化物歧化酶的方法無效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200710055710.4 | 申請(qǐng)日： | 2007-05-31 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN101096663A | 公開（公告）日： | 2008-01-02 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 王曉平;王擁軍;郝東云;張同海;張今;張雷;曲和之;黃露;杜珊珊 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 王曉平;王擁軍 |
| 主分類號(hào)： | C12N9/08 | 分類號(hào)： | C12N9/08 |
| 代理公司： | 吉林長(zhǎng)春新紀(jì)元專利代理有限責(zé)任公司 | 代理人： | 魏征驥 |
| 地址： | 130021吉*** | 國(guó)省代碼： | 吉林;22 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 無花果 樹葉 提取 超氧化物歧化酶 方法 | ||
1、一種從無花果樹樹葉中提取超氧化物歧化酶的方法，包括下列步驟：
一、抽提
選新鮮或低溫保鮮的無花果樹樹葉100克，清洗，加入500～1000mL含0.1～0.5mM?EDTA/0.1～0.5％甘油0.01～0.05％β-巰基乙醇、pH7.8的磷酸鈉緩沖液，勻漿，抽提1～2小時(shí)，除渣過濾，5000～8000rpm離心10min；
二、鹽析
向上清液中加入固體硫酸銨至40％飽和度，8000～10000rpm離心10min，向上清中補(bǔ)加硫酸銨至85％飽和度，靜置1～2小時(shí)，8000～10000rpm離心10～20min。沉淀用50～80ml的5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液溶解，并在4℃下對(duì)該緩沖液透析40～60小時(shí)，8000～10000rpm離心5～10min，收集上清液；
三、陰離子交換層析
將上清液加入經(jīng)5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液平衡的DEAE-Sepharose?Fast?Flow陰離子交換柱，用5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液洗脫未結(jié)合的蛋白，采用5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液含0.1～0.2M的氯化鈉洗脫目的蛋白，以紫外檢測(cè)并收集蛋白峰，同時(shí)檢測(cè)其酶活性，合并活性峰，凍干濃縮至3～5ml；
四、Sephacryl?S-100?HR凝膠過濾層析
將前經(jīng)凍干濃縮的樣品，加入經(jīng)5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液平衡的Sephacryl?S-100?HR層析柱，用5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液洗脫，以紫外檢測(cè)并收集蛋白峰，同時(shí)檢測(cè)其酶活性，合并活性峰；進(jìn)行酶活檢測(cè)及相關(guān)鑒定。
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