[發明專利]一種從無花果樹樹葉中提取超氧化物歧化酶的方法

無效

• 申請號: 200710055710.4
• 申請日: 2007-05-31
• 公開（公告）號: CN101096663A
• 公開（公告）日: 2008-01-02
• 發明（設計）人: 王曉平;王擁軍;郝東云;張同海;張今;張雷;曲和之;黃露;杜珊珊
• 申請（專利權）人: 王曉平;王擁軍
• 主分類號: C12N9/08
• 分類號: C12N9/08
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司
• 代理人: 魏征驥

1、一種從無花果樹樹葉中提取超氧化物歧化酶的方法，包括下列步驟：

一、抽提

選新鮮或低溫保鮮的無花果樹樹葉100克，清洗，加入500～1000mL含0.1～0.5mM?EDTA/0.1～0.5％甘油0.01～0.05％β-巰基乙醇、pH7.8的磷酸鈉緩沖液，勻漿，抽提1～2小時，除渣過濾，5000～8000rpm離心10min；

二、鹽析

向上清液中加入固體硫酸銨至40％飽和度，8000～10000rpm離心10min，向上清中補加硫酸銨至85％飽和度，靜置1～2小時，8000～10000rpm離心10～20min。沉淀用50～80ml的5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液溶解，并在4℃下對該緩沖液透析40～60小時，8000～10000rpm離心5～10min，收集上清液；

三、陰離子交換層析

將上清液加入經5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液平衡的DEAE-Sepharose?Fast?Flow陰離子交換柱，用5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液洗脫未結合的蛋白，采用5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液含0.1～0.2M的氯化鈉洗脫目的蛋白，以紫外檢測并收集蛋白峰，同時檢測其酶活性，合并活性峰，凍干濃縮至3～5ml；

四、Sephacryl?S-100?HR凝膠過濾層析

將前經凍干濃縮的樣品，加入經5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液平衡的Sephacryl?S-100?HR層析柱，用5～10mM，pH7.8的磷酸鈉緩沖液洗脫，以紫外檢測并收集蛋白峰，同時檢測其酶活性，合并活性峰；進行酶活檢測及相關鑒定。