[發明專利]生產林可霉素用復合培養基及提高產量和質量的生產方法

無效

• 申請號: 200710054463.6
• 申請日: 2007-05-31
• 公開（公告）號: CN101092597A
• 公開（公告）日: 2007-12-26
• 發明（設計）人: 李德文;張小貝;王冰;段永平;趙晴;曾憲芳;吳彥
• 申請（專利權）人: 南陽普康藥業有限公司
• 主分類號: C12N1/00
• 分類號: C12N1/00;C12P19/00
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所
• 代理人: 聶孟民

一、技術領域

本發明涉及生物制藥領域，特別是生產林可霉素用復合培養基及提高產量和質量的生產方法。

二、背景技術

林可霉素(lincomycin)是1962年在美國發現的抗生素，從鏈霉菌林可變種培養液中獲得，對革蘭氏陽性菌有效，特別是金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、β溶血性鏈球菌、草綠色鏈球菌和肺炎鏈球菌等有良好抑菌作用，對厭氧菌有良好的抗菌作用。由于其對組織和細胞的穿透力強，應用方便，不需做皮試，抗感染療效顯著，因此獲得廣泛應用于醫療、畜牧業和林可霉素衍生產品克林霉素、克林霉素磷酸酯、克林霉素棕櫚酸酯的起始原料。林可霉素含A、B兩組分，其主要成分為A組分即林可霉素，分子式為C₁₈H₃₄N₂O₆S；B組分分子式為C₁₇H₃₂N₂O₆S。兩組分在結構上的區別為：A組分在4位上為正丙基，而B組分為乙基(見分子結構式)。A、B組分在藥理上存在很大區別，相對于A組分，B組分抗菌活性較低且毒性較大。因此成品中B組分含量是決定林可霉素質量的重要指標，也是衡量工藝的重要指標。

中國于上世紀七十年代開始生產林可霉素，該藥品已成為醫藥工業中的一種老產品。隨著林可霉素衍生產品克林霉素、克林霉素磷酸酯等的研發和生產，對林可霉素B組分的要求越來越嚴格，如克林霉素生產要求林可霉素B含量低于1.7％，克林霉素磷酸酯生產要求林可霉素B含量低于0.7％。長期以來，由于工藝自身發展的局限，產品質量、生產得率及生產周期似已達極限。目前該藥品的生產發酵周期在160～190小時，提煉純化收率83％，發酵效率為6000～6300單位/毫升，成品中林可霉素B組分含量在3.0％～4.0％之間，林可霉素B組分含量3.0％以下的產品還需要對傳統工藝生產的林可霉素采取特殊的萃取分離精制工藝進行處理才能得到，并且溶劑、能源消耗和環境污染增加了生產成本。現有發酵培養基的缺點為：泡沫多，裝罐容積率只有73％；購買玉米淀粉進行液化、糖化，加葡萄糖、蔗糖、豆餅粉、玉米漿、生物素、磷酸鹽、硫酸胺、玉米油等用于補充碳源、氮源和消沫，培養基綜合成本高，廠家品種多，質量難以有效控制。因此，如何提高林可霉素產量和質量成為當務之急。

三、發明內容

本發明的目的是克服現有技術存在的問題，提供一種適合生產林可霉素的更為有效、使用性能可靠，且造價低、使用經濟的生產林可霉素用復合培養基及提高產量和質量的生產方法，有效解決提高林可霉素生產效率、提高產量和提高林可霉素質量、降低林可霉素B組分的問題，所說的林可霉素的分子結構式為：

林可霉素A、林可霉素B兩主要組分的結構區別在于四位上的取代基不同。林可霉素A組分的R為正丁基，林可霉素B組分的R為乙基。

為實現上述目的，本發明生產林可霉素的復合培養基所采取的技術方案是：該復合培養基起始物由下列原料及重量份配比制成：玉米粉70～75份、玉米淀粉25～30份、α-淀粉酶0.02份、糖化酶0.9～1.1份、蛋白酶0.0001～0.0005份、乳酸鈣0.18～0.22份、水240～300份。

所述玉米粉和玉米淀粉采用南陽普康藥業有限公司和農戶定向推廣種植的玉米品種先行5號生產，玉米收購去雜后粉碎過60目篩制成粒徑240～260微米玉米粉，玉米淀粉采用傳統淀粉生產工藝生產；

α-淀粉酶為每1毫升25000活力計量單位；

糖化酶為每1毫升10000活力計量單位；

蛋白酶為每1克3000000活力計量單位；

復合培養基的制備方法步驟如下：

1、按組方配比量取2/3量的玉米粉、玉米淀粉、乳酸鈣、水加入反應罐中，并按組方配比量加入2/3量的α-淀粉酶，升溫至59～61℃進行第一階段液化2小時；

2、按組方配比量取1/3量的玉米粉、玉米淀粉、乳酸鈣、水續加入反應罐中，并按組方配比量加入1/3量的α-淀粉酶，升溫至84～86℃進行第二階段液化1.5小時；

3、液化液降溫至60℃，按組方配比量加入糖化酶、蛋白酶，保溫反應7.5～8.5小時；

4、視反應液呈粘稠流動性深黃色液體時，降至常溫或逐漸加入氫氧化鈉或氫氧化鉀調整PH值至6.0～7.0，即可終止反應，制成本發明的復合培養基，檢測結果復合培養基內含有(質量濃度)：葡萄糖30％～35％，總糖35～42％，氮2.5％～4.0％，溶解磷每毫升330微克～400微克。