[發(fā)明專利]人白細(xì)胞介素24增強(qiáng)抗結(jié)核的作用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200710052156.4
• 申請(qǐng)日: 2007-05-11
• 公開（公告）號(hào): CN101070542A
• 公開（公告）日: 2007-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 章曉聯(lián);孫平
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 武漢大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/24
• 分類號(hào): C12N15/24;C07K14/54;A61K38/20;A61P31/06
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司
• 代理人: 王守仁

1.人白細(xì)胞介素24的重組質(zhì)粒pVAX-1-IL-24，其構(gòu)建包括用PCR法將人白細(xì)胞介素24cDNA從pcDNA3.1-IL-24擴(kuò)增與純化，得純化的PCR產(chǎn)物，構(gòu)建到真核表達(dá)載體pVAX-1上，其特征是包括以下步驟：

(1)重組質(zhì)粒pVAX-1-IL-24的構(gòu)建和獲得：

將純化的PCR產(chǎn)物和載體pVAX-1用BamHI和XhoI雙酶切后，分別回收酶切產(chǎn)物，用T4DNA連接酶定向?qū)⑷税准?xì)胞介素24基因片段與pVAX-1連接，以連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化入DH5α感受態(tài)細(xì)菌，在LB?kan+培養(yǎng)基中篩選培養(yǎng)；挑取陽(yáng)性克隆，培養(yǎng)后小量提取質(zhì)粒，用BamHI和XhoI雙酶切，在1％瓊脂糖凝膠檢測(cè)，獲得正確的重組質(zhì)粒pVAX-1-IL-24，

其中，PCR所用的上游引物p1、下游引物p2的序列分別為SEQ?ID?NO.2、SEQ?ID?NO.3所示的核苷酸序列，即：

上游引物p1：5′-GGGATCATGAATTTTCAACAGAGGCTG-3′，酶切位點(diǎn)為BamHI，

下游引物p2：5′-CCTCGAGTCAGAGCTTGTAGAATTTCTGC-3′，酶切位點(diǎn)為XhoI；

(2)重組質(zhì)粒pVAX-1-IL-24DNA的制備：

將鑒定正確的含有質(zhì)粒pVAX-1-IL-24的菌在LB?kan+培養(yǎng)基中于37℃振蕩培養(yǎng)過(guò)夜，用生理鹽水調(diào)節(jié)細(xì)菌濃度為2×10⁸/ml；根據(jù)大量提取試劑盒操作提取并純化質(zhì)粒；將抽提的質(zhì)粒溶解于生理鹽水中，測(cè)OD260/OD280的比值為1.70～1.85，適于DNA注射所用；然后將質(zhì)粒的濃度調(diào)節(jié)到1μg/μL。

2.一種根據(jù)權(quán)利要求1所述人白細(xì)胞介素24的重組質(zhì)粒pVAX-1-IL-24DNA在增強(qiáng)抗結(jié)核作用藥物中的應(yīng)用。