[發明專利]蘇丹紅Ⅰ人工抗原的合成方法

無效

• 申請號: 200710051935.2
• 申請日: 2007-04-23
• 公開（公告）號: CN101293911A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 陳福生;王小紅;余偉;周有祥;吳佳佳
• 申請（專利權）人: 陳福生
• 主分類號: C07K1/10
• 分類號: C07K1/10;G01N33/53
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明屬于免疫學技術領域，具體涉及陽離子化載體蛋白的制備及蘇丹紅I-陽離子化蛋白偶聯物的合成方法。將合成的偶聯物作為免疫原免疫動物，可提高機體的免疫應答水平，制備高質量的抗蘇丹紅I抗體。

背景技術

蘇丹紅I(Sudan?I)是一種人工合成的偶氮類、油溶性的化工染色劑，非食用色素。Sudan?I在體內的代謝產物為苯胺和1-氨基-2-萘酚。苯胺一方面可直接作用于肝細胞，引起中毒性肝病，還可能誘發肝細胞基因發生變異，增加了人體癌變的幾率；另一方面，苯胺的代謝物(硝基苯衍生物等)可將血紅蛋白結合的Fe²⁺氧化為Fe³⁺，導致血紅蛋白無法結合氧而患上高鐵血紅蛋白癥。而Sudan?I的另一代謝產物萘酚具有致癌、致畸、致敏、致突變的潛在毒性。基于上述原因，國際癌癥研究機構(International?Agency?for?Research?on?Cancer，IARC)將SudanI歸為第三類致癌物，即動物致癌物。所以自1995年起歐盟等國家已禁止其作為色素在食品中進行添加，我國也在1996年的《食品添加劑衛生標準》中明令禁止使用Sudan?I。但是由于Sudan?I價廉易得，穩定性強，特別是添加了Sudan?I的辣椒粉等調味品的色澤鮮亮持久，因此仍有不法食品商販在食品加工中違規使用Sudan?I。近年來國內外一系列的“蘇丹紅事件”更是引發了世界各國對食品中蘇丹紅安全性問題的恐慌，因此建立實用、快捷、準確、可靠的Sudan?I檢測方法至關重要。

目前，國內外對蘇丹紅的檢測大多采用HPLC或HPLC/GC-MS檢測方法，配以紫外可見光檢測器、二極管陣列檢測器、電噴霧離子化檢測器等檢測器，實驗準確度高重復性好，但樣品前處理過程復雜、儀器昂貴、不適應現場簡單快速和大批量樣品的分析檢測，導致了對Sudan?I的管理處于被動、滯后的局面，難以遏制不法廠家的不軌行為。近年來，以酶聯免疫吸附法(enzyme?linked?immunosorbent?assay，ELISA)為代表的免疫學方法，因其靈敏、特異、快速、操作簡便和攜帶方便等優點而越來越被人們重視和采納，是食品安全快速檢測的發展方向。文獻資料檢索表明，利用免疫學方法進行蘇丹紅檢測的研究在國內外還未見報道，因此，本發明進行了Sudan?I人工抗原的合成研究，旨為其免疫學分析方法的建立奠定基礎。

為了建立Sudan?I的免疫分析方法，必須得到抗Sudan?I抗體，Sudan?I的分子量為248，是小分子物質，而無法直接免疫動物得到抗體，必須進行抗原改造，制備人工抗原。Sudan?I人工抗原的合成是免疫學分析的關鍵。由于Sudan?I本身沒有能直接與載體蛋白偶聯的羧基或氨基，本發明利用了陽離子化載體蛋白胺甲基化原理合成了Sudan?I-陽離子化載體蛋白的偶聯物。在Sudan?I的結構中，由于其酚羥基鄰位有活潑氫原子，可通過甲醛的偶聯作用，與陽離子化載體蛋白的胺乙基發生胺甲基化偶聯。由于陽離子化載體蛋白的羧基幾乎全部被胺乙基取代，因而整個蛋白帶正電，作為完全抗原免疫動物時，較之普通蛋白的偶聯物，陽離子化載體蛋白更易與機體內帶弱負電的細胞膜表面結合，進而被抗原提呈細胞識別和刺激機體內的免疫應答，同時，也提高了機體對共價偶聯在陽離子化載體蛋白半抗原(Sudan?I)的識別和應答水平，即可刺激抗原提呈細胞對半抗原決定簇的提呈、促進T淋巴細胞和B淋巴細胞的增殖。

本發明從SudanI的結構出發，根據胺甲基化反應的經典理論，發明了用陽離子化載體蛋白構建Sudan?I-載體蛋白偶聯物的方法。相關研究國內外尚未見報道。

主要參考文獻

[1]Beasley?H?L，Skerritt?J?H，Desmarchelier?J?M.Rapid?field?tests?for?the?organophosthates，fenitrothion?andpirimiphos-methyl-reliable?estimates?of?pesticide?residues?in?stored?grain，J.Stored?Prod.Res.，1993，29，357-369