[發明專利]蘇丹紅Ⅰ人工抗原的合成方法

無效

• 申請號: 200710051935.2
• 申請日: 2007-04-23
• 公開（公告）號: CN101293911A
• 公開（公告）日: 2008-10-29
• 發明（設計）人: 陳福生;王小紅;余偉;周有祥;吳佳佳
• 申請（專利權）人: 陳福生
• 主分類號: C07K1/10
• 分類號: C07K1/10;G01N33/53
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.陽離子化蛋白，其特征在于結構式：

其中，載體蛋白的羧基幾乎全部被胺乙基取代，整個蛋白帶正電，因而作為完全抗原免疫動物時，陽離子化載體蛋白更易與機體內帶弱負電的細胞膜表面結合，進而被抗原提呈細胞識別和刺激機體內的免疫應答。

2.Sudan?I-陽離子化蛋白偶聯物，其特征在于它的分子結構式為：

其中，載體蛋白可以是陽離子化牛血清白蛋白(Cationized?bovine?serum?albumin，cBSA)、陽離子化卵清白蛋白(Cationized?ovalbumin，cOVA)、陽離子辣根過氧化物酶(Cationized?horseradish?peroxidase，cHRP)、陽離子化血孔匙蛋白(Cationized?keyholelimpet?hemocyanin，cKLH)或陽離子化多聚賴氨酸(Cationized?ploy-L-lysine，cPLL)，分別與Sudan?I結合得到Sudan?I-cBSA、Sudan?I-cOVA、Sudan?I-cHRP、Sudan?I-cKLH和Sudan?I-cPLL。

3.制備權利要求1所述一種陽離子化載體蛋白的方法，其特征在于實驗步驟包括：

(1)制備cBSA，步驟如下：

將20～100μL乙二胺(ethylenediamine，EDA)加入到冰浴的500μL?0.1mol/L?2-乙烷磺酸(2-(N-morpholino)ethane?sulfonic?acid，MES)緩沖液中，并用1mol/L?HCl將pH調節到4～6，然后，將5～100mg?BSA溶解在50μL的上述MES緩沖液后，與上述EDA溶液混勻，再在上述混合液中添加2～50mg的碳化亞二胺(1-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide，EDC)，室溫攪拌1～12h，用4mol/L的醋酸終止反應，用去離子水充分透析48～72h后，將其凍藏備用。

(2)制備cOVA，步驟如下：

將20～100μL?EDA加入到冰浴的500μL?0.1mol/L?MES緩沖液中，并用1mol/L?HCl將pH調節到4～6，然后，將5～100mg?OVA溶解在100μL的上述MES緩沖液后，與上述EDA溶液混勻，再在上述混合液中添加2～50mg的EDC，室溫攪拌1～12h，用4mol/L的醋酸終止反應，用去離子水充分透析48～72h后，將其凍藏備用。

(3)制備cHRP，步驟如下：

將20～100μL?EDA加入到冰浴的500μL?0.1mol/L?MES緩沖液中，并用1mol/L?HCl將pH調節到4～6，然后，將5～100mg?HRP溶解在500μL的上述MES緩沖液后，與上述EDA溶液混勻，再在上述混合液中添加2～50mg的EDC，室溫攪拌1～12h，用4mol/L的醋酸終止反應，用去離子水充分透析48～72h后，凍藏備用。

(4)制備cKLH，步驟如下：

將20～100μL?EDA加入到冰浴的500μL?0.1mol/L?MES緩沖液中，并用1mol/L?HCl將pH調節到4～6，再將5～100mg?KLH溶解于800μL的上述MES緩沖液后，與上述EDA溶液混勻，再在上述混合液中添加2～50mg的EDC，室溫攪拌1～12h后，用4mol/L的醋酸終止反應，用去離子水充分透析48～72h后，凍藏備用。

(5)制備cPLL，步驟如下：

將20～100μLEDA加入到冰浴的500μL?0.1mol/L?MES緩沖液中，并用1mol/L?HCl將pH調節到4～6，再將5～100mg?PLL溶解于1000μL的上述MES緩沖液，然后，與上述EDA溶液混勻，再在上述混合液中添加2～50mg的EDC，室溫攪拌1～12h后，用4mol/L的醋酸終止反應，最后用去離子水充分透析48～72h，凍藏備用。

所用EDA體積在20μL～100μL之間，所用的載體蛋白質量在5mg～100mg之間，EDA與MES的體積比在1∶25～1∶5之間，MES緩沖液的pH調節到4～6。