[發明專利]一種多基因干擾的shRNA質粒表達載體及其構建方法與應用

無效

• 申請號: 200710048473.9
• 申請日: 2007-02-13
• 公開（公告）號: CN101245352A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 馬義才;顧敏;馬靈
• 申請（專利權）人: 馬義才
• 主分類號: C12N15/63
• 分類號: C12N15/63;C12N15/66;A61K48/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?一種可用于同時表達多個shRNA的載體pSilencer-U6/H1-(shRNA)n，由兩組多克隆位點序列(MCS)、多個shRNA轉錄單位和質粒序列組成，兩組多克隆位點序列之間可串聯多個shRNA轉錄單位，多個shRNA轉錄單位可用于多次表達一個靶基因，或表達一個靶基因的多個不同位點，或表達不同靶基因，其特征在于：所述載體的兩組多克隆位點序列為：

MCS₁(共21bp)：5’-AATTGGTACCTCTAGATATCG-3’

3’-CCATGGAGATCTATAGCTTAA-5’；

MCS₂(共20bp)：5’-AGCTTACTAGTGATATCTGC-3’

3’-ATGATCACTATAGACGTCGA-5’。

2.?權利要求1所述載體pSilencer-U6/H1-(shRNA)n，其特征在于：所述載體的每個shRNA轉錄單位包含一個哺乳動物啟動子U6或H1、以及連接在啟動子U6或H1之后的靶基因shRNA編碼序列。

3.?權利要求1或2所述載體的shRNA轉錄單位，其特征在于：位于轉錄單位啟動子U6或H1之后的靶基因shRNA編碼序列如下：

(1)為任何疾病基因靶序列，序列結構通式為：

5’-↓GATCCCNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTCAAGAGANNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTTTTTGGAAA-3(Sense)

3’-GGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAGTTCTCTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNAAAAAACCTTTTCGA↓-5’(Antisense)

(BamHI：G↓GATCC；HindIII：A↓AGCTT)

其中劃線部分的N為A、T、C、G四種堿基中的任何一種，正義鏈(Sense)和反義鏈(Antisense)的堿基反向互補；

(2)包括：

①HIV-1?env

5’-↓GATCCCTCAGTTTATGGGATCAAAGTTCAAGAGACTTTGATCCCATAAACTGATTTTTTGGAAA-3’(Sense)

3’-GGAGTCAAATACCCTAGTTTCAAGTTCTCTGAAACTAGGGTATTTGACTAAAAAACCTTTTCGA↓-5’(Antisense)

(BamHI：G↓GATCC；HindIII：A↓AGCTT)

②HIV-1?gag

5’-↓?GATCCCGATTGTACTGAGAGACAGGTTCAAGAGACCTGTCTCTCAGTACAATCTTTTTTGGAAA-3’(Sense)

3’-GGCTAACATGACTCTCTGTCCAAGTTCTCTGGACAGAGAGTCATGTTAGAAAAAACCTTTTCGA↓-5’(Antisense)

(BamHI：G↓GATCC；HindIII：A↓AGCTT)

③HIV-1?pol

5’-↓GATCCCATGGACAGTACAGCCTATATTCAAGAGATATAGGCTGTACTGTCCATTTTTTTGGAAA-3’(Sense)

3’-GGTACCTGTCATGTCGGATATAAGTTCTCTATATCCGACATGACAGGTAAAAAAACCTTTTCGA↓-5’(Antisense)

(BamHI：G↓GATCC；HindIII：A↓AGCTT)

④HIV-1?vif

5’-↓?GATCCCGTTCAGAAGTACACATCCCTTCAAGAGAGGGATGTGTACTTCTGAACTTTTTTGGAAA-3’(Sense)

3’-GGCAAGTCTTCATGTGTAGGGAAGTTCTCTCCCTACACATGAAGACTTGAAAAAACCTTTTCGA?↓-5’(Antisense)

(BamHI：G↓GATCC；HindIII：A↓AGCTT)

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