[發明專利]利用分子印跡聚合物凈化紅霉素的方法

無效

• 申請號: 200710047691.0
• 申請日: 2007-11-01
• 公開（公告）號: CN101148464A
• 公開（公告）日: 2008-03-26
• 發明（設計）人: 張大兵;武愛波;宋素泉
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C07H17/08
• 分類號: C07H17/08;C07H1/06;B01D15/34;G01N1/34;G01N30/06
• 代理公司: 上海交達專利事務所
• 代理人: 王錫麟;王桂忠

技術領域

本發明涉及的是一種生物化學工程技術領域的方法，具體的說，是一種利用分子印跡聚合物凈化紅霉素的方法。

背景技術

紅霉素(Erythromycin，簡稱ERY)屬于大環內酯類抗生素，是一種廣泛使用的人畜共用的藥物，它可以和細菌的核糖體結合，阻止細菌蛋白的合成，從而起到抑制細菌的作用。如果使用不當會造成殘留。對人，畜，環境造成損傷或污染。長期食用紅霉素超標的動物性食品，會對人的耳蝸和前庭神經造成損害，甚至會危害到肝腎的功能。

為了保證人民的身體健康，世界各國對紅霉素的使用和殘留都做了嚴格的規定并制定了相應的標準，其中歐盟在動物性食品中不同組織規定的限量不同，但最高不能高于400ppm。我國2002年起規定在動物性食品中不得檢出紅霉素。因此開發靈敏的食品中痕量存在的紅霉素的檢測方法十分必要。由于動物性食品的基質復雜，而紅霉素往往痕量存在，所以有必要對紅霉素進行前處理，從而提高檢測的靈敏度。目前通用的前處理的方法有液液分配、固相萃取、免疫柱層析技術等，其中固相萃取技術因為操作簡單，節約試劑，可同時處理多個樣品而得到廣泛應用。但是由于目前常用的固相萃取的填料與吸附目標物的作用都是非特異的，固定相的選擇性低，易受復雜基質的干擾，限制了該項技術的發展。分子印跡技術是基于分子識別基礎上一種功能聚合物制備技術，該聚合物合成時采用目的分子或者類似物作為模板，合成后將模板洗脫后，內部保留和目的分子互補的空間結構和基團，且具有“記憶”功能，可特異的和模板分子發生作用，并通過相應的方式洗脫，從而達到純化和富集目的分子的作用。由于分子印跡聚合物是采用化學方法合成的，具有抵抗酸堿等惡劣環境的優點，可重復使用，所以應用越來越廣泛。

經對現有技術文獻的檢索發現，Martin等在《THE?JOURNAL?OF?ANTIBIOTICS》(抗生素雜志)1996，50(1)，89-91上發表的文章“Separation?and?Detectionof?Macrolide?Antibiotics?by?HPLC?Using?Macrolide-imprinted?Syntheticpolymers?as?stationary?phase”(使用分子印跡的方法合成的大環內酯類抗生素的的分子印跡聚合物用于高效液相色譜的固定相)合成的紅霉素分子印跡聚合物并嘗試將其作為高效液相色譜的填料并進行了評價。這項研究首次證明結構復雜的大環內酯類抗生素可以作為印跡分子合成分子印跡聚合物，且合成的聚合物可以特異性的吸附相應的印跡分子。但是該文章只是理論上的探索性研究，并沒有記載合成的材料應用到樣品的前處理方面。劉亞等(2006)在其論文《硅膠表面替米考星分子印跡聚合物的制備及性能研究》(北京化工大學，碩士研究生論文)中合成了同為大環內酯類抗生素的替米考星的分子印跡聚合物，并對其物理化學性質進行了分析。但是該文章只是停留在聚合物物理特征的描述和吸附性能的評價階段。并沒有實際應用。到目前為止還沒有紅霉素分子印跡聚合物固相萃取小柱的實際應用的報道。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中的不足，提供一種利用分子印跡聚合物凈化紅霉素的方法，從而彌補現有環境中，動物性食品中紅霉素殘留檢測前處理的弊端，簡單、快速、特異、高效的純化和富集痕量紅霉素，提高現有檢測的靈敏度。

本發明是通過以下技術方案實現的：本發明包括如下步驟如下：

(1)將模板分子即紅霉素、功能單體甲基丙烯酸和交聯劑乙二醇二甲基丙烯酸酯(EGDMA)，按模板分子∶功能單體∶交聯劑摩爾比＝1∶2～8∶20，混合溶解到致孔劑中，致孔劑的成分為甲醇和乙腈的混合溶液，比例為2∶3。當模板分子為0.5mol時，致孔劑的體積為2.5～5ml。加入引發劑偶氮二異丁氰(AIBN)；體系在氮氣氛下封口，60～70℃熱引發聚合24～48小時；

(2)將合成的聚合物磨碎后，分篩得到粒徑在30～60μm之間的顆粒，除去微細的顆粒，最后通過索氏萃取24～72小時進一步除去模板分子；萃取劑的組成為甲醇、醋酸混合液，二者的比例為9∶1。

(3)將除去模板分子的聚合物60℃干燥過夜，獲得紅霉素的分子印跡聚合物；

(4)將紅霉素分子印跡聚合物填充到固相萃取柱管中；

所述的填充到固相萃取柱管，是指：用甲醇淋洗聚丙烯固相萃取小柱和篩板，稱量紅霉素分子印跡聚合物，用甲醇勻漿后，填充于商品化的1ml～6ml聚丙烯固相萃取小柱內。

所述的稱量紅霉素分子印跡聚合物，其質量為20mg～200mg。