[發明專利]一種有利于減少水蛭素降解的重組畢赤酵母菌株及其構建方法有效
| 申請號： | 200710046231.6 | 申請日： | 2007-09-21 |
| 公開（公告）號： | CN101157896A | 公開（公告）日： | 2008-04-09 |
| 發明（設計）人： | 周祥山;張元興;倪振華 | 申請（專利權）人： | 華東理工大學;山東東阿阿膠股份有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/19 | 分類號： | C12N1/19;C12N15/57;C12N9/50;C12R1/84 |
| 代理公司： | 上海智信專利代理有限公司 | 代理人： | 王潔 |
| 地址： | 20023*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 有利于 減少 水蛭 降解 重組 酵母 菌株 及其 構建 方法 | ||
1.一種有利于減少水蛭素降解的重組畢赤酵母菌株，其特征在于，所述重組畢赤酵母菌株中含有失活的KEX1基因。
2.如權利要求1所述的重組畢赤酵母菌株，其特征在于，相對于未失活的KEX1基因，所述的失活的KEX1基因的編碼區及非編碼區插入了或缺失了DNA片段。
3.如權利要求2所述的重組畢赤酵母菌株，其特征在于，所述的失活的KEX1基因的編碼區缺失了第289～1728位堿基序列，其編碼的蛋白酶缺失了第97～576位氨基酸。
4.如權利要求3所述的重組畢赤酵母菌株，其特征在于，采用所述重組畢赤酵母菌株表達水蛭素的發酵過程中，完整水蛭素占總水蛭素的比例達到了60％～90％，完整水蛭素產量達到了2.9g/l。
5.一種制備如權利要求1所述的重組畢赤酵母菌株的方法，其特征在于，包括步驟：使一種畢赤酵母菌株含有的未失活的KEX1基因失活，從而獲得所述重組畢赤酵母菌株。
6.如權利要求5所述的方法，其特征在于，在所述的未失活的KEX1基因的編碼區及非編碼區插入或缺失DNA片段。
7.如權利要求6所述的方法，其特征在于，采用Pop-In/Pop-Out的方法缺失了所述的未失活的KEX1基因編碼區的第289～1728位堿基序列，即缺失了其編碼的蛋白酶的第97～576位氨基酸。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于，包括步驟：
a.構建KEX1基因體外缺失片段；
b.構建含sh?ble基因的pPOPBle載體；
c.將所述KEX1基因體外缺失片段插入所述pPOPBle載體，獲得pPOPBleΔkex1載體；
d.線性化所述pPOPBleΔkex1載體，轉化畢赤酵母菌GS115Hir。
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